Navegação por assunto "plasmids"

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  • IPEN-DOC 18608

    HIGUTI, E.; CECCHI, C.R.; OLIVEIRA, N.A.J.; VIEIRA, D.P. ; JENSEN, T.G.; JORGE, A.A.L.; BARTOLINI, P. ; PERONI, C.N. . Growth responses following a single intra-muscular hGH plasmid administration compared to daily injections of hGH in dwarf mice. In: GORDON RESEARCH CONFERENCE, July 1-6, 2012, Lucca, Italia. Abstract... 2012.

    Palavras-Chave: gene therapy; sth; dna; immunity; mice; plasmids; intramuscular injection

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  • IPEN-DOC 15598

    CECCHI, C.R.; OLIVEIRA, N.A.J.; HIGUTI, E.; JENSEN, M.; BARTOLINI, P. ; PERONI, C.N. . Highly significant body weight increase of Lit/Scid mice after electrotransfer of hGH-coding plasmid DNA. In: REUNIAO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE BIOQUIMICA E BIOLOGIA MOLECULAR, 39., 18-21 de maio, 2010, Foz do Iguacu, PR. Resumos... 2010.

    Palavras-Chave: gene therapy; dna damages; dna; in vivo; mice; muscles; plasmids; sth

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  • IPEN-DOC 28338

    AFFONSO, REGINA ; SUZUKI, MIRIAM F. ; MAGALHAES, GERALDO S.; BARTOLINI, PAOLO . Influence of the expression vector and its elements on recombinant human prolactin synthesis in Escherichia coli; co-directional orientation of replication and transcription is highly critical. Journal of Microbiological Methods, v. 191, p. 1-8, 2021. DOI: 10.1016/j.mimet.2021.106340

    Abstract: The aim of the present work was to define a bacterial expression system that is particularly efficient for the synthesis of recombinant human prolactin (hPRL). In previous work, based on experiments that were basically carried out in parallel with the present ones, the synthesis of rec-hPRL by the p1813-hPRL vector in E. coli HB2151 was >500 mg/L, while it was much lower here (2.5–4-fold), in the RB791 and RRI strains. The highest positive influence on rec-hPRL synthesis was due to the transcription-replication co-orientation of hPRL cDNA and the ori/antibiotic resistance gene, responsible for up to a ~ 5–6-fold higher expression yield. In conclusion, this work confirmed that each bacterial strain of E. coli has a genetic background that can allow a different level of heterologous protein synthesis. The individual study of each element indicated that its action critically depends on the reading orientation in which it is located inside the vector: co-directional orientation of replication and transcription, in fact, greatly increased the level of rec-hPRL expression

    Palavras-Chave: lth; escherichia coli; collisions; plasmids; dna

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  • IPEN-DOC 21168

    PEREZ, FERNANDA dos S.A. . Influência da temperatura de cultivo na expressão de proteínas recombinantes de interesse terapêutico no espaço periplásmico bacteriano, utilizando o promotor lambda PL / Influence of the cultivation temperature on the expression of recombinant proteins of therapeutic interest in the periplasmic space, using lambda PL promoter . 2015. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. 87 p. Orientador: Carlos Roberto Jorge Soares. DOI: 10.11606/T.85.2015.tde-19102015-150711

    Abstract: O sistema de expressão baseado nos promotores PL ou PR do fago lambda que usualmente é regulado pelo repressor termo lábil (cIts) é amplamente utilizado para produzir proteínas recombinantes em células procarióticas. No entanto, o aumento da temperatura requerido neste sistema para promover a inativação do repressor apresenta algumas limitações, como o aumento da expressão de proteínas de HSP (Heat Shock Proteins), por exemplo, proteases, que dependendo da natureza da proteína expressa podem ser prejudiciais ou não. Uma outra limitação é a ativação da resposta SOS, resultando na parada da replicação do DNA celular ou dependendo da cepa pode ocorrer lise celular. Nesse trabalho nós descrevemos o uso do promotor λPL para expressão constitutiva, isto é, sem a regulação do repressor. Nós otimizamos diferentes condições de cultura para aumentar a secreção no espaço periplásmico de Escherichia coli de cinco proteínas: o hormônio do crescimento humano (hGH), que tem sido amplamente utilizado no tratamento de crianças com deficiência e/ou resistência ao hGH, síndrome de Turner, entre outras desordens; prolactina humana (hPRL), um hormônio polipeptídico conhecido por estimular a lactação e por exercer ação regulatória no crescimento e na diferenciação da glândula mamária, dois antagonistas de hPRL, estudados como potenciais fármacos para o tratamento de alguns tipos de cânceres e por fim o interferon α2a (IFN-α2a), que é uma citocina produzida pelas células, em resposta a diferentes estímulos, incluindo ácidos nucléicos virais, células estranhas (particularmente as neoplásicas), antígenos de bactérias, protozoários e vírus. No caso do IFN-α2a, essa citocina de alto valor agregado e de importante aplicação terapêutica, foi desenvolvida em nosso laboratório como parte desse trabalho, incluindo o desenvolvimento e a validação da metodologia de análise por HPLC de fase reversa para determinação do IFN presente no fluído periplásmico bacteriano ou na sua forma pura. As principais estratégias utilizadas para melhorar a expressão foram iniciar a indução junto à densidade óptica máxima do crescimento bacteriano e otimizar a temperatura de indução para controlar a expressão da proteína heteróloga. Essa metodologia pode ser utilizada nos casos onde o produto não será tóxico para a célula hospedeira ou quando a instabilidade do plasmídeo não é problema. A possibilidade de cultivo em temperaturas mais baixas, já que o repressor termo-sensível não se encontra presente, colaborou para o aumento significativo da expressão, mesmo para proteínas menos sensíveis à temperatura de cultivo, como o hGH.

    Palavras-Chave: recombinant dna; proteins; escherichia coli; sth; lth; peptide hormones; plasmids; chromatography

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  • IPEN-DOC 21588

    PERONI, CIBELE N. ; CECCHI, CLAUDIA R. ; HIGUTI, ELIZA ; BARTOLINI, PAOLO . Modelos de terapia gênica baseados na expressão de hormônio de crescimento em células humanas e na administração de DNA plasmidial em camundongos anões. In: RESENDE, RODRIGO R. (Org.); SOCCOL, CARLOS R. (Org.). Biotecnologia Aplicada à Saúde. São Paulo: Editora Blucher, 2015. p. 843-874,

    Palavras-Chave: gene therapy; sth; animal cells; plasmids; mice; fibroblasts; in vivo; adenovirus; skin diseases; animals

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  • IPEN-DOC 18896

    CECCHI, CLAUDIA R. . Obtenção de um modelo homólogo de terapia gênica mediante administração direta de um plasmídeo com o gene do hormônio de crescimento murino em camundongos anões imunocompetentes / An homologous model of gene therapy by in vivo administration of a plasmid containing the mouse growth hormone gene in immunocompetent dwarf mice . 2013. Tese (Doutoramento) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. 67 p. Orientador: Cibele Nunes Peroni. DOI: 10.11606/T.85.2013.tde-15042013-094237

    Abstract: Níveis sustentáveis de hormônio de crescimento humano (hGH) circulante e aumento de peso altamente significativo, avaliados também em comparação a repetidas injeções de hormônio, foram observados em trabalhos anteriores, baseados na eletrotransferência de DNA plasmidial no músculo de camundongos anões imunodeficientes (lit/scid). No presente trabalho, um modelo animal homólogo de terapia gênica para GH foi estudado mediante clonagem da sequência genômica do DNA de GH de camundongo (mGH-gDNA), a qual substituiu o hGH-gDNA no vetor que havia sido utilizado em camundongos anões imunodeficientes. O novo vetor, agora nomeado UBI-mGH-gDNA, foi utilizado em camundongos anões imunocompetentes (lit/lit). Foi primeiramente realizado um teste in vitro, transfectando-se células humanas HEK 293 com este plasmídeo e obtendo-se uma expressão de 3,0 &mu;g mGH/106 células/dia, contra 3,7 &mu;g mGH/106 células/dia, para o UBI-hGH-gDNA. Estes dois plasmídeos foram então injetados (50 &mu;g/animal) no músculo quadríceps de camundongos, seguido de eletroporação, realizando um ensaio de 94 dias. Enquanto após 15 dias, as inclinações das curvas de variação de peso relacionadas ao mGH, hGH e salina foram 0,130, 0,112 e 0,027 g/camundongo/dia, respectivamente, após 94 dias, as inclinações correspondentes foram 0,041, 0,028 e 0,033 g/camundongo/dia. As análises estatísticas mostraram que após 15 dias, as inclinações das duas curvas com o GH foram significativamente maiores que a inclinação do controle (P<0,001), enquanto que após 94 dias, somente a inclinação da curva do mGH foi maior que a do controle (P<0,005). A porcentagem de aumento de peso nos animais tratados com o gene do mGH, após 94 dias, foi de 34,3%, enquanto que o comprimento nariz-cauda e o comprimento do fêmur, dois parâmetros que medem diretamente o crescimento longitudinal, foram de 9,5% e 26%, respectivamente, quando comparados aos valores iniciais. A interrupção do crescimento progressivo do grupo tratado com hGH não foi inesperada, considerando a óbvia reação imunogênica dos animais imunocompetentes contra o GH humano e não contra o de camundongo (título do anticorpo anti-hGH 1:100 a 1:3200). A inclinação altamente positiva do grupo controle, já observada em camundongos lit/lit mas não em lit/scid, é provavelmente devida ao ganho de peso natural desta linhagem, não suportada, contudo, por um proporcional crescimento longitudinal. Níveis circulatórios de mGH da ordem de 4 ng/mL foram detectados após 15 dias para o grupo tratado com o mGH, enquanto o grupo controle apresentou níveis em torno de 0,7 ng mGH/mL (P<0,001). Níveis circulatórios de mIGF-I foram também determinados nos dias 15, 45 e 94 nos animais tratados com mGH, sempre mostrando valores 1,5 - 3,0 vezes maiores que o grupo controle, e valores 1,2-1,6 vezes maiores que o grupo tratado com hGH. Este modelo de tratamento homólogo pode ser considerado uma primeira abordagem e um importante suporte para futuros ensaios pré-clínicos baseados na administração de DNA plasmidial para o tratamento da deficiência de GH humano.

    Palavras-Chave: gene therapy; plasmids; dna-cloning; mice; sth; intramuscular injection; immunity

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  • IPEN-DOC 27539

    LIMA, ELIANA R. ; CECCHI, CLAUDIA R. ; HIGUTI, ELIZA ; JESUS, GUSTAVO P.P. de ; GOMES, ALISSANDRA M. ; ZACARIAS, ENIO A. ; BARTOLINI, PAOLO ; PERONI, CIBELE N. . Optimization of mouse growth hormone plasmid DNA electrotransfer into tibialis cranialis muscle of "little" mice. Molecules, v. 25, n. 21, p. 1-9, 2020. DOI: 10.3390/molecules25215034

    Abstract: Previous non-viral gene therapy was directed towards two animal models of dwarfism: Immunodeficient (lit/scid) and immunocompetent (lit/lit) dwarf mice. The former, based on hGH DNA administration into muscle, performed better, while the latter, a homologous model based on mGH DNA, was less efficient, though recommended as useful for pre-clinical assays. We have now improved the growth parameters aiming at a complete recovery of the lit/lit phenotype. Electrotransfer was based on three pulses of 375 V/cm of 25 ms each, after mGH-DNA administration into two sites of each non-exposed tibialis cranialis muscle. A 36-day bioassay, performed using 60-day old lit/lit mice, provided the highest GH circulatory levels we have ever obtained for GH non-viral gene therapy: 14.7 ± 3.7 ng mGH/mL. These levels, at the end of the experiment, were 8.5 ± 2.3 ng/mL, i.e., significantly higher than those of the positive control (4.5 ± 1.5 ng/mL). The catch-up growth reached 40.9% for body weight, 38.2% for body length and 82.6%–76.9% for femur length. The catch-up in terms of the mIGF-1 levels remained low, increasing from the previous value of 5.9% to the actual 8.5%. Although a complete phenotypic recovery was not obtained, it should be possible starting with much younger animals and/or increasing the number of injection sites.

    Palavras-Chave: gene therapy; hormones; dna; muscles; mice; plasmids; bioassay

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  • IPEN-DOC 10164

    BENTO, F.M.; TAKESHITA, D.; SACRAMENTO, C.B.; MACHADO, T.R.; MATHOR, M.B. ; CARMONA, A.K.; HAN, S.W.. Over expression of the selectable marker blasticidin S deaminase gene is toxic human keratinocytes and murine BALB/MK cells. BMC Biotechnology, v. 4, n. 1, p. 1-13, 2004.

    Palavras-Chave: genes; bacillus cereus; inactivation; plasmids; toxicity; mammals; cell killing; viruses; antibiotics; apoptosis

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  • IPEN-DOC 21730

    HIGUTI, ELIZA ; CECCHI, CLAUDIA R. ; OLIVEIRA, NELIO A.J. ; LIMA, ELIANA R. ; VIEIRA, DANIEL P. ; AAGAARD, LARS; JENSEN, THOMAS G.; JORGE, ALEXANDER A.L.; BARTOLINI, PAOLO ; PERONI, CIBELE N. . Partial correction of the dwart phenotype by non-viral transfer of the growth hormone gene in mice: treatment age is critical. Growth Hormone and IGF Research, v. 26, p. 1-7, 2016.

    Palavras-Chave: biotechnology; gene therapy; sth; genes; phenotype; mice; animals; plasmids; bioassay; weight

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  • IPEN-DOC 09785

    SOARES, C.R.J. ; GOMIDE, F.I.C.; UEDA, E.K.M.; BARTOLINI, P. . Periplasmic expression of human growth hormone via plasmid vectors containing the lambdaPsub(L) promoter: use of HPLC for product quantification. Protein Engineering. Design and Selection, v. 16, n. 12, p. 1131-1138, 2003.

    Palavras-Chave: sth; recombinant dna; escherichia coli; cell cultures; bacteriophages; peptides; plasmids; high-performance liquid chromatography

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  • IPEN-DOC 05328

    DIAS, LIGIA E.M.F. . Producao de prolactina humana autentica por tecnicas de DNA recombinante. 1993. Tese (Doutoramento) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP, Sao Paulo. 90 p. Orientador: Paolo Bartolini.

    Palavras-Chave: lth; production; recombinant dna; radioimmunoassay; hormones; escherichia coli; diagnostic techniques; sth; proteins; plasmids

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  • IPEN-DOC 21804

    SILVA, ALINE B. da ; SOARES, CARLOS R.J. . Síntese e caracterização de prolactina de camundongos em células CHO. In: PROGRAMA INSTITUCIONAL DE BOLSAS DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA, 18.; PROGRAMA DE BOLSAS E INICIAÇÃO CIENTÍFICA CNEN, 9.; PROGRAMA INSTITUCIONAL DE BOLSAS DE INICIAÇÃO DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO E INOVAÇÃO, 2., 24-25 de outubro, 2012, São Paulo, SP. Resumo expandido... 2012.

    Palavras-Chave: genes; synthesis; lth; mice; animals; plasmids; immunoassay; cho cells

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  • IPEN-DOC 16679

    OLIVEIRA, NELIO A. de J.; CECCHI, CLAUDIA R.; HIGUTI, ELIZA; BARTOLINI, PAOLO ; PERONI, CIBELE N. . Sustained hGH expression after electrotransfer of naked DNA into DWARF 'little!' mouse skeletal muscle. Molecular Therapy, v. Suppl. 1, p. S57, 2009.

    Palavras-Chave: dna; gene therapy; in vivo; mice; muscles; plasmids; sth; intramuscular injection

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  • IPEN-DOC 16651

    OLIVEIRA, N.A.J.; CECCHI, C.R.; HIGUTI, E.; BARTOLINI, P. ; PERONI, C.N. . Sustained hGH expression after electrotransfer of naked DNA into DWARF 'little!' mouse skeletal muscle. In: AMERICAN SOCIETY OF GENE THERAPY ANNUAL MEETING, May 27-30, 2009, San Diego, California. Abstract... 2009.

    Palavras-Chave: dna; gene therapy; in vivo; mice; muscles; plasmids; sth; intramuscular injection

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  • IPEN-DOC 28508

    OLIVEIRA, JOAO E. ; SUZUKI, MIRIAM F. ; DAMIANI, RENATA; LIMA, ELIANA R.; AMARAL, KLEICY C. ; SANTOS, ANDERSON M.S.; MAGALHAES, GERALDO S.; FAVERANI, LEONARDO P.; PEREIRA, LUIS A.V.D.; BARTOLINI, PAOLO . Synthesis of human bone morphogenetic protein-2 (hBMP-2) in E. coli periplasmic space: its characterization and preclinical testing. Cells, v. 10, n. 12, p. 1-16, 2021. DOI: 10.3390/cells10123525

    Abstract: Human BMP-2, a homodimeric protein that belongs to the TGF- family, is a recognized osteoinductor due to its capacity of inducing bone regeneration and ectopic bone formation. The administration of its recombinant form is an alternative to autologous bone grafting. A variety of E. coli-derived hBMP-2 has been synthesized through refolding of cytoplasmic inclusion bodies. The present work reports the synthesis, purification, and characterization of periplasmic hBMP-2, obtained directly in its correctly folded and authentic form, i.e., without the initial methionine typical of the cytoplasmic product that can induce undesired immunoreactivity. A bacterial expression vector was constructed including the DsbA signal peptide and the cDNA of hBMP-2. The periplasmic fluid was extracted by osmotic shock and analyzed via SDS-PAGE, Western blotting, and reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). The purification was carried out by heparin affinity chromatography, followed by high-performance size-exclusion chromatography (HPSEC). HPSEC was used for qualitative and quantitative analysis of the final product, which showed >95% purity. The classical in vitro bioassay based on the induction of alkaline phosphatase activity in myoblastic murine C2C12 cells and the in vivo bioassay consisting of treating calvarial critical-size defects in rats confirmed its bioactivity, which matched the analogous literature data for hBMP-2.

    Palavras-Chave: bone tissues; proteins; plasmids; critical size; defects

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  • IPEN-DOC 20291

    ARTHUSO, FERNANDA dos S. ; SUZUKI, MIRIAM F. ; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; OLIVEIRA, JOAO E. de ; BARTOLINI, PAOLO ; SOARES, CARLOS R.J. . The influence of Escherichia coli cultivation temperature on interferon alpha 2a expression (IFN-'alfa'2a). BMC Proceedings, v. 8, Suppl 4, p. 2, 2014.

    Palavras-Chave: hormones; recombinant dna; pituitary hormones; cho cells; sth; lth; interferon; escherichia coli; temperature dependence; plasmids

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  • IPEN-DOC 19796

    ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SUZUKI, MIRIAM F. ; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; OLIVEIRA, JOAO E. de; BARTOLINI, PAOLO ; SOARES, CARLOS R.J. . The influence of Escherichia coli cultivation temperature on interferon alpha expression (IFN-'alfa'2a). In: CONGRESSO BRASILEIRO DE BIOTECNOLOGIA, 5., 4-11 de outubro, 2013, Florianopolis, SC. Resumo... 2013.

    Palavras-Chave: hormones; recombinant dna; pituitary hormones; cho cells; sth; lth; interferon; temperature dependence; plasmids

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  • IPEN-DOC 08543

    DEPPMAN, A. ; GUAL, M.R.; HOYOS, O.R.; COELHO, P.R.P. . Updating of two-step model for the neutron interaction with the DNA in BNCT research facility of IPEN. In: REUNIAO DE TRABALHO SOBRE FISICA NUCLEAR NO BRASIL, 25., 31 ago. - 4 set, 2002, Sao Pedro, SP. Resumo... 2002.

    Palavras-Chave: irradiation devices; neutron capture therapy; boron; dna; strand breaks; plasmids; neutrons

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Buscar os artigos apresentados em um evento internacional de 2015, sobre loss of coolant, do autor Maprelian.

Autor: Maprelian

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O gerenciamento do Repositório está a cargo da Biblioteca do IPEN. Constam neste RI, até o presente momento 20.950 itens que tanto podem ser artigos de periódicos ou de eventos nacionais e internacionais, dissertações e teses, livros, capítulo de livros e relatórios técnicos. Para participar do RI-IPEN é necessário que pelo menos um dos autores tenha vínculo acadêmico ou funcional com o Instituto. Nesta primeira etapa de funcionamento do RI, a coleta das publicações é realizada periodicamente pela equipe da Biblioteca do IPEN, extraindo os dados das bases internacionais tais como a Web of Science, Scopus, INIS, SciElo além de verificar o Currículo Lattes. O RI-IPEN apresenta também um aspecto inovador no seu funcionamento. Por meio de metadados específicos ele está vinculado ao sistema de gerenciamento das atividades do Plano Diretor anual do IPEN (SIGEPI). Com o objetivo de fornecer dados numéricos para a elaboração dos indicadores da Produção Cientifica Institucional, disponibiliza uma tabela estatística registrando em tempo real a inserção de novos itens. Foi criado um metadado que contém um número único para cada integrante da comunidade científica do IPEN. Esse metadado se transformou em um filtro que ao ser acionado apresenta todos os trabalhos de um determinado autor independente das variáveis na forma de citação do seu nome.

A elaboração do projeto do RI do IPEN foi iniciado em novembro de 2013, colocado em operação interna em julho de 2014 e disponibilizado na Internet em junho de 2015. Utiliza o software livre Dspace, desenvolvido pelo Massachusetts Institute of Technology (MIT). Para descrição dos metadados adota o padrão Dublin Core. É compatível com o Protocolo de Arquivos Abertos (OAI) permitindo interoperabilidade com repositórios de âmbito nacional e internacional.

1. Portaria IPEN-CNEN/SP nº 387, que estabeleceu os princípios que nortearam a criação do RDI, clique aqui.


2. A experiência do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN-CNEN/SP) na criação de um Repositório Digital Institucional – RDI, clique aqui.

O Repositório Digital do IPEN é um equipamento institucional de acesso aberto, criado com o objetivo de reunir, preservar, disponibilizar e conferir maior visibilidade à Produção Científica publicada pelo Instituto, desde sua criação em 1956.

Operando, inicialmente como uma base de dados referencial o Repositório foi disponibilizado na atual plataforma, em junho de 2015. No Repositório está disponível o acesso ao conteúdo digital de artigos de periódicos, eventos, nacionais e internacionais, livros, capítulos, dissertações, teses e relatórios técnicos.

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