INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGÉTICAS E NUCLEARES
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Navegação por título da publicação "SARS-CoV-2 Spike (S) glycoprotein expression, purification and characterization in suspension human embryonic kidney cells 293"

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  • IPEN-DOC 28628

    FREIRE, RENAN P. ; SILVA, FELIPE D. ; VITALE, PHELIPE; TODESCHINI, IRIS; MENEZES, FILIPE ; OLIVEIRA, JOAO E. de ; OLIVEIRA, MONA das N.; SOARES, CARLOS R.J. . SARS-CoV-2 Spike (S) glycoprotein expression, purification and characterization in suspension human embryonic kidney cells 293. In: PROTEIN EXPRESSION IN ANIMAL CELLS CONFERENCE, 15th, September 13-16, 2021, Online. Abstract... 2021.

    Abstract: SARS-CoV-2 is a zoonotic virus RNA positive, which became responsible to be the largest sanitary crisis faced by humanity: Coronavirus disease 2019 (COVID-19). Some symptoms include major sneeze conditions, who could evolve to severe acute respiratory syndrome, and in some cases, to death. Techniques for accurate detection of this virus are essential to promote an accurate diagnosis of infected patients. SARS-CoV-2 has several targets with clinical interest; although, the focuses is on Spike (S), a homotrimer glycoprotein, that interacts with angiotensin converting enzyme receptor (ACE2), developing the infection in host cells. Thus, we recognize that the demand for the glycoprotein S is necessary, requiring large amounts with high purity level. The current work has the main objective the transient expression of SARS-CoV-2 S protein into suspension human embryonic kidney cells 293 (HEK293), purification and characterization, to use it as a template for discovering new molecular markers. SARSCoV- 2 S modified protein cDNA was inserted into pαH plasmid, amplified, and purified. For transient recombinant protein expression, 7.5 x 107 HEK293 cells (Expi293FTM cells) was seeded in 27 mL Expi293™ culture Medium. The transfection was carried out with a cationic lipid ExpiFectamine™ and 30 μg of plasmid, mixed with 3 mL Opti-Mem® culture medium. Cell culture was maintained for seven days in 125 mL vent cap Erlenmeyer, 32 ºC, 8% CO2, under 125 rpm orbital shaker rotation. 10 mL aliquots were collected on four- and seven-day post transfection, stored at -80 ºC. Physical-chemical and biological characterizations were determined by SDS-PAGE, ELISA, and Western Blotting. Purification from 40 mL of conditioned medium was carried out in two steps: Strep-Tag affinity column, followed by a size exclusion Superose® 6 (10/300), 5.0 mg of oligomeric recombinant protein with 95% purity was obtained. We believe that this process can be easily adapted to different volumes, being very useful for obtaining, in a short time, enough pure and immunological active SARS-CoV-2 S for further studies and applications, such as, cryogenic electron microscopy, mass spectroscopy, N-glycan structures, antibody production and immunologic assays development.

    Palavras-Chave: coronaviruses; glycoproteins; kidneys; embryonic cells; diagnostic techniques

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O gerenciamento do Repositório está a cargo da Biblioteca do IPEN. Constam neste RI, até o presente momento 20.950 itens que tanto podem ser artigos de periódicos ou de eventos nacionais e internacionais, dissertações e teses, livros, capítulo de livros e relatórios técnicos. Para participar do RI-IPEN é necessário que pelo menos um dos autores tenha vínculo acadêmico ou funcional com o Instituto. Nesta primeira etapa de funcionamento do RI, a coleta das publicações é realizada periodicamente pela equipe da Biblioteca do IPEN, extraindo os dados das bases internacionais tais como a Web of Science, Scopus, INIS, SciElo além de verificar o Currículo Lattes. O RI-IPEN apresenta também um aspecto inovador no seu funcionamento. Por meio de metadados específicos ele está vinculado ao sistema de gerenciamento das atividades do Plano Diretor anual do IPEN (SIGEPI). Com o objetivo de fornecer dados numéricos para a elaboração dos indicadores da Produção Cientifica Institucional, disponibiliza uma tabela estatística registrando em tempo real a inserção de novos itens. Foi criado um metadado que contém um número único para cada integrante da comunidade científica do IPEN. Esse metadado se transformou em um filtro que ao ser acionado apresenta todos os trabalhos de um determinado autor independente das variáveis na forma de citação do seu nome.

A elaboração do projeto do RI do IPEN foi iniciado em novembro de 2013, colocado em operação interna em julho de 2014 e disponibilizado na Internet em junho de 2015. Utiliza o software livre Dspace, desenvolvido pelo Massachusetts Institute of Technology (MIT). Para descrição dos metadados adota o padrão Dublin Core. É compatível com o Protocolo de Arquivos Abertos (OAI) permitindo interoperabilidade com repositórios de âmbito nacional e internacional.

1. Portaria IPEN-CNEN/SP nº 387, que estabeleceu os princípios que nortearam a criação do RDI, clique aqui.


2. A experiência do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN-CNEN/SP) na criação de um Repositório Digital Institucional – RDI, clique aqui.

O Repositório Digital do IPEN é um equipamento institucional de acesso aberto, criado com o objetivo de reunir, preservar, disponibilizar e conferir maior visibilidade à Produção Científica publicada pelo Instituto, desde sua criação em 1956.

Operando, inicialmente como uma base de dados referencial o Repositório foi disponibilizado na atual plataforma, em junho de 2015. No Repositório está disponível o acesso ao conteúdo digital de artigos de periódicos, eventos, nacionais e internacionais, livros, capítulos, dissertações, teses e relatórios técnicos.

A elaboração do projeto do RI do IPEN foi iniciado em novembro de 2013, colocado em operação interna em julho de 2014 e disponibilizado na Internet em junho de 2015. Utiliza o software livre Dspace, desenvolvido pelo Massachusetts Institute of Technology (MIT). Para descrição dos metadados adota o padrão Dublin Core. É compatível com o Protocolo de Arquivos Abertos (OAI) permitindo interoperabilidade com repositórios de âmbito nacional e internacional.

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