Navegação IPEN por assunto "zika virus"
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Navegação IPEN por assunto "zika virus"
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SILVA, CLEIDE M.R. da
; CHURA-CHAMBI, ROSA M.
; PEREIRA, LENNON R.; CORDEIRO, YRAIMA; FERREIRA, LUIS C. de S.; MORGANTI, LIGIA
. Association of high pressure and alkaline condition for solubilization of inclusion bodies and refolding of the NS1 protein from zika virus.
BMC Biotechnology,
v. 18,
n. 78,
2018.
DOI:
10.1186/s12896-018-0486-2
Abstract:
Background: Proteins in inclusion bodies (IBs) present native-like secondary structures. However, chaotropic agents at
denaturing concentrations, which are widely used for IB solubilization and subsequent refolding, unfold these
secondary structures. Removal of the chaotropes frequently causes reaggregation and poor recovery of bioactive
proteins. High hydrostatic pressure (HHP) and alkaline pH are two conditions that, in the presence of low level of
chaotropes, have been described as non-denaturing solubilization agents. In the present study we evaluated the
strategy of combination of HHP and alkaline pH on the solubilization of IB using as a model an antigenic form of the
zika virus (ZIKV) non-structural 1 (NS1) protein.
Results: Pressure-treatment (2.4 kbar) of NS1-IBs at a pH of 11.0 induced a low degree of NS1 unfolding and led to
solubilization of the IBs, mainly into monomers. After dialysis at pH 8.5, NS1 was refolded and formed soluble
oligomers. High (up to 68 mg/liter) NS1 concentrations were obtained by solubilization of NS1-IBs at pH 11 in the
presence of arginine (Arg) with a final yield of approximately 80% of total protein content. The process proved to be
efficient, quick and did not require further purification steps. Refolded NS1 preserved biological features regarding
reactivity with antigen-specific antibodies, including sera of ZIKV-infected patients. The method resulted in an increase
of approximately 30-fold over conventional IB solubilization-refolding methods.
Conclusions: The present results represent an innovative non-denaturing protein refolding process by means of the
concomitant use of HHP and alkaline pH. Application of the reported method allowed the recovery of ZIKV NS1 at a
condition that maintained the antigenic properties of the protein.
Palavras-Chave: zika virus; proteins; viral diseases; hydrostatics; pressure dependence; high pressure; ph value; alkaline hydrolysis
. Association of high pressure and alkaline condition for solubilization of inclusion bodies and refolding of the NS1 protein from zika virus. BMC Biotechnology, v. 18, n. 78, 2018. DOI: 10.1186/s12896-018-0486-2. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/29402. Acesso em: $DATA.Como referenciar este itemEsta referência é gerada automaticamente de acordo com as normas do estilo IPEN/SP (ABNT NBR 6023) e recomenda-se uma verificação final e ajustes caso necessário.
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PEREIRA, LENNON R.; ALVES, RUBENS P. dos S.; SALES, NATIELY S.; ANDREATA-SANTOS, ROBERT; VENCESLAU-CARVALHO, ALEXIA A.; PEREIRA, SAMUEL S.; CASTRO-AMARANTE, MARIA F.; RODRIGUES-JESUS, MONICA J.; FAVARO, MARIANNA T. de P.; CHURA-CHAMBI, ROSA M.
; MORGANTI, LIGIA
; FERREIRA, LUIS C. de S.. Enhanced immune responses and protective immunity to Zika virus induced by a DNA vaccine encoding a chimeric NS1 fused with type 1 Herpes virus gD protein.
Frontiers in Medical Technology,
v. 2,
p. 1-14,
2020.
DOI:
10.3389/fmedt.2020.604160
Abstract:
Zika virus (ZIKV) is a globally-distributed flavivirus transmitted to humans by Aedes mosquitoes, usually causing mild symptoms that may evolve to severe conditions, including neurological alterations, such as neonatal microcephaly and Guillain-Barré syndrome. Due to the absence of specific and effective preventive methods, we designed a new subunit vaccine based on a DNA vector (pgDNS1-ZIKV) encoding the non-structural protein 1 (NS1) genetically fused to the Herpes Simplex Virus (HSV) glycoprotein D (gD) protein. Recombinant plasmids were replicated in Escherichia coli and the expression of the target protein was confirmed in transfected HEK293 cells. C57BL/6 and AB6 (IFNAR1–/–) mice were i.m. immunized by electroporation in order to evaluate pgDNS1-ZIKV immunogenicity. After two doses, high NS1-specific IgG antibody titers were measured in serum samples collected from pgDNS1-ZIKV-immunized mice. The NS1-specific antibodies were capable to bind the native protein expressed in infected mammalian cells. Immunization with pgDNS1-ZIKV increased both humoral and cellular immune responses regarding mice immunized with a ZIKV NS1 encoding vaccine. Immunization with pgDNS1-ZIKV reduced viremia and morbidity scores leading to enhanced survival of immunodeficient AB6 mice challenged with a lethal virus load. These results give support to the use of ZIKV NS1 as a target antigen and further demonstrate the relevant adjuvant effects of HSV-1 gD.
Palavras-Chave: viruses; zika virus; vaccines; immunity; dna; proteins; influenza; influenza viruses; glycoproteins; herpes simplex; arthropods; enzyme immunoassay; mice
. Enhanced immune responses and protective immunity to Zika virus induced by a DNA vaccine encoding a chimeric NS1 fused with type 1 Herpes virus gD protein. Frontiers in Medical Technology, v. 2, p. 1-14, 2020. DOI: 10.3389/fmedt.2020.604160. Disponível em: http://200.136.52.105/handle/123456789/31770. Acesso em: $DATA.Como referenciar este itemEsta referência é gerada automaticamente de acordo com as normas do estilo IPEN/SP (ABNT NBR 6023) e recomenda-se uma verificação final e ajustes caso necessário.
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SILVA, MATHEUS S.; TAVARES, ANA P.M.; COELHO, LUIZ F.L.; DIAS, LIGIA E.M.F.
; CHURA-CHAMBI, ROSA M.
; FONSECA, FLAVIO G. da; SALES, MARIA G.F.; FIGUEIREDO, EDUARDO C.. Rational selection of hidden epitopes for a molecularly imprinted electrochemical sensor in the recognition of heat-denatured dengue NS1 protein.
Biosensors and Bioelectronics,
v. 191,
p. 1-8,
2021.
DOI:
10.1016/j.bios.2021.113419
Abstract:
Rational selection of predicted peptides to be employed as templates in molecular imprinting was carried out for the heat-denatured non-structural protein 1 (NS1) of dengue virus (DENV). Conservation analysis among 301 sequences of Brazilian isolates of DENV and zika virus (ZIKV) NS1 was carried out by UniProtKB, and peptide selection was based on in silico data of the conservational, structural and immunogenic properties of the sequences. The selected peptide (from dengue 1 NS1) was synthesized and employed as a template in the electropolymerization of polyaminophenol-imprinted films on the surface of carbon screen-printed electrodes. Heat denaturation of the protein was carried out prior to analysis, in order to expose its internal hidden epitopes. After removal of the template, the molecularly imprinted cavities were able to rebind to the whole denatured protein as determined by electrochemical impedance spectroscopy. This label-free sensor was efficient to distinguish the NS1 of DENV from the NS1 of ZIKV. Additionally, the sensor was also selective for dengue NS1, in comparison with human serum immunoglobulin G and human serum albumin. Additionally, the device was able to detect the DENV NS1 at concentrations from 50 to 200 μg L−1 (RSD below 5.04%, r = 0.9678) in diluted human serum samples. The calculated LOD and LOQ were, respectively, 29.3 and 88.7 μg L−1 and each sensor could be used for six sequential cycles with the same performance.
Palavras-Chave: viral diseases; viral diseases; zika virus; protein denaturation; polymers; sensors
. Rational selection of hidden epitopes for a molecularly imprinted electrochemical sensor in the recognition of heat-denatured dengue NS1 protein. Biosensors and Bioelectronics, v. 191, p. 1-8, 2021. DOI: 10.1016/j.bios.2021.113419. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/32642. Acesso em: $DATA.Como referenciar este itemEsta referência é gerada automaticamente de acordo com as normas do estilo IPEN/SP (ABNT NBR 6023) e recomenda-se uma verificação final e ajustes caso necessário.
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SANTOS, DAVID P. dos
.
Renaturação da proteína de envelope do vírus da zika e do domínio III da mesma proteína utilizando altas pressões
/ Refolding of zika virus envelope protein and domain III of the same protein using high pressures
.
2018.
Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) -
Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP,
São Paulo.
60 p.
Orientador: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias.
DOI:
10.11606/D.85.2020.tde-03022020-094942
Abstract:
Grande parte das proteínas de importância biomédica são encontradas em concentrações pequenas nas suas formas nativas. Uma alternativa para obtenção de proteínas em grande escala é síntese por bactérias Escherichia coli geneticamente modificadas. Entretanto, frequentemente essas proteínas são produzidas como agregados insolúveis e inativos, denominados de corpos de inclusão (CI). Para se tornarem bioativas as proteínas nos CI devem ser renaturadas. O nosso objetivo foi o estabelecimento de um processo rápido e eficiente de obtenção da proteína de envelope (E) e do domínio III desta mesma proteína (EDIII) do vírus da ZIKA (ZIKV) solúveis e com atividade imunológica a partir de CI. A utilização destas proteínas se justifica pela sua relevância para o desenvolvimento de ensaios diagnósticos e para a produção de vacinas de ZIKV. A associação de alta pressão e pH alcalino se mostrou eficiente para a solubilização dos CI. A incubação dos CI em alta pressão (2,4 kbar por 90 min e 0,4 kbar por 14,5 h) em pH de 10,5 foi a melhor condição encontrada na qual foi obtida solubilização eficiente dos CI com baixa desnaturação proteica. O enovelamento das proteínas presentes nos sobrenadantes das suspensões submetidas à alta pressão foi obtido por diálise em tampão em pH de 8,5. A recuperação do E solúvel nesta condição foi de mais de 90% e a de EDIII foi de 80% em relação às quantidades totais dessas proteínas nos CI e os rendimentos foram de 130 mg de E e de 35 mg de EDIII/L de cultura bacteriana. As proteínas E e EDIII permaneceram imunologicamente ativas e foram recuperadas principalmente como monômeros e dímeros. O procedimento proposto representa uma alternativa para a produção de proteínas recombinantes imunologicamente ativas expressas como CI.
Palavras-Chave: zika virus; molecular biology; elementary particles; proteins; bacterial spores; cell cultures; pressure range mega pa 10-100; immunotherapy; micellar systems; biotechnology
. Renaturação da proteína de envelope do vírus da zika e do domínio III da mesma proteína utilizando altas pressões. Orientador: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias. 2018. 60 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2020.tde-03022020-094942. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/30804. Acesso em: $DATA.Como referenciar este itemEsta referência é gerada automaticamente de acordo com as normas do estilo IPEN/SP (ABNT NBR 6023) e recomenda-se uma verificação final e ajustes caso necessário.
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.
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O gerenciamento do Repositório está a cargo da Biblioteca do IPEN. Constam neste RI, até o presente momento 20.950 itens que tanto podem ser artigos de periódicos ou de eventos nacionais e internacionais, dissertações e teses, livros, capítulo de livros e relatórios técnicos. Para participar do RI-IPEN é necessário que pelo menos um dos autores tenha vínculo acadêmico ou funcional com o Instituto. Nesta primeira etapa de funcionamento do RI, a coleta das publicações é realizada periodicamente pela equipe da Biblioteca do IPEN, extraindo os dados das bases internacionais tais como a Web of Science, Scopus, INIS, SciElo além de verificar o Currículo Lattes. O RI-IPEN apresenta também um aspecto inovador no seu funcionamento. Por meio de metadados específicos ele está vinculado ao sistema de gerenciamento das atividades do Plano Diretor anual do IPEN (SIGEPI). Com o objetivo de fornecer dados numéricos para a elaboração dos indicadores da Produção Cientifica Institucional, disponibiliza uma tabela estatística registrando em tempo real a inserção de novos itens. Foi criado um metadado que contém um número único para cada integrante da comunidade científica do IPEN. Esse metadado se transformou em um filtro que ao ser acionado apresenta todos os trabalhos de um determinado autor independente das variáveis na forma de citação do seu nome.
A elaboração do projeto do RI do IPEN foi iniciado em novembro de 2013, colocado em operação interna em julho de 2014 e disponibilizado na Internet em junho de 2015. Utiliza o software livre Dspace, desenvolvido pelo Massachusetts Institute of Technology (MIT). Para descrição dos metadados adota o padrão Dublin Core. É compatível com o Protocolo de Arquivos Abertos (OAI) permitindo interoperabilidade com repositórios de âmbito nacional e internacional.
1. Portaria IPEN-CNEN/SP nº 387, que estabeleceu os princípios que nortearam a criação do RDI, clique aqui.
2. A experiência do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN-CNEN/SP) na criação de um Repositório Digital Institucional – RDI, clique aqui.
O Repositório Digital do IPEN é um equipamento institucional de acesso aberto, criado com o objetivo de reunir, preservar, disponibilizar e conferir maior visibilidade à Produção Científica publicada pelo Instituto, desde sua criação em 1956.
Operando, inicialmente como uma base de dados referencial o Repositório foi disponibilizado na atual plataforma, em junho de 2015. No Repositório está disponível o acesso ao conteúdo digital de artigos de periódicos, eventos, nacionais e internacionais, livros, capítulos, dissertações, teses e relatórios técnicos.
A elaboração do projeto do RI do IPEN foi iniciado em novembro de 2013, colocado em operação interna em julho de 2014 e disponibilizado na Internet em junho de 2015. Utiliza o software livre Dspace, desenvolvido pelo Massachusetts Institute of Technology (MIT). Para descrição dos metadados adota o padrão Dublin Core. É compatível com o Protocolo de Arquivos Abertos (OAI) permitindo interoperabilidade com repositórios de âmbito nacional e internacional.
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