INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGÉTICAS E NUCLEARES
Repositório Digital da Produção Técnico Científica

Expressão de tireotrofina humana em células de embrião de rim humano (HEK293)

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dc.contributor.advisor Maria Teresa de Carvalho Pinto Ribela pt_BR
dc.date 2016 pt_BR
dc.date.accessioned 2016-12-22T16:39:39Z
dc.date.available 2016-12-22T16:39:39Z
dc.identifier.uri http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/26947
dc.description.abstract Neste trabalho foi transfectada uma linhagem de células embrionárias de rim humano (HEK293) com os genes das subunidades α e β da tireotrofina humana (hTSH), hormônio glicoproteico secretado pela hipófise. Após 5 dias de cultivo obteve-se uma concentração de hTSH no meio condicionado de 0,95μg/mL. O material foi concentrado e purificado utilizando uma estratégia envolvendo duas etapas, uma cromatografia de troca catiônica e uma cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) de fase reversa, que permitiu uma recuperação de 55% e uma pureza >90%. O produto purificado (hTSH-HEK) foi analisado e comparado a uma preparação comercial obtida em células CHO (hTSH-CHO) e a uma preparação hipofisária (hTSH-Pit). A identidade e a pureza do hTSH-HEK foram avaliadas por métodos físicoquímicos e imunológico (espectrometria de massa MALDI-TOF, HPLC de exclusão molecular e de fase reversa, SDS-PAGE e ensaio imunoradiométrico). A porção glicídica do hTSH-HEK foi avaliada pela análise do perfil dos N-glicanos e o comportamento biológico deste hormônio foi avaliado por bioensaio in vivo e estudo farmacocinético. As 3 preparações apresentaram pureza equivalente (97%) e a massa molecular relativa do hTSH-HEK foi 2,1% menor do que a do hTSH-CHO e 2,7% maior do que a do hTSH-Pit. A maior hidrofobicidade relativa, avaliada por RP-HPLC, foi a do hTSH-HEK. Os N-glicanos identificados no hTSH-HEK foram do tipo complexo, apresentando predominantemente estruturas tri-antenárias, enquanto no hTSH-CHO e no hTSH-Pit as estruturas bi-antenárias foram predominantes. Foram detectadas diferenças significativas relacionadas à composição dos carboidratos para estas preparações, um teor muito menor de ácido siálico e muito maior de fucose foram observados no hTSHHEK. Foi confirmada a atividade biológica das 3 preparações, sendo a bioatividade do hTSHHEK 39% e 16% inferior à do hTSH-CHO e hTSH-Pit, respectivamente. A meia-vida circulatória do hTSH-HEK foi menor (1,5 X) que a do hTSH-CHO e a do hTSH-Pit (1,2 X). De acordo com esses resultados o hTSH-HEK pode ser considerado uma alternativa viável para aplicações clínicas especialmente por sua origem humana e composição de carboidratos. pt_BR
dc.format.extent 64 pt_BR
dc.rights openAccess pt_BR
dc.subject animal cells pt_BR
dc.subject kidneys pt_BR
dc.subject embryonic cells pt_BR
dc.subject animal tissues pt_BR
dc.subject tissue cultures pt_BR
dc.subject recombinant dna pt_BR
dc.subject trh pt_BR
dc.subject thyroid pt_BR
dc.subject liberins pt_BR
dc.subject peptide hormones pt_BR
dc.subject protein engineering pt_BR
dc.subject glycoproteins pt_BR
dc.subject pituitary gland pt_BR
dc.subject carbohydrates pt_BR
dc.subject bioassay pt_BR
dc.subject labelled compounds pt_BR
dc.subject cations pt_BR
dc.subject chromatography pt_BR
dc.subject high-performance liquid chromatography pt_BR
dc.subject gamma spectrometers pt_BR
dc.subject beta spectrometers pt_BR
dc.subject spectrometers pt_BR
dc.subject pulse analyzers pt_BR
dc.subject nuclear engineering pt_BR
dc.title Expressão de tireotrofina humana em células de embrião de rim humano (HEK293) pt_BR
dc.title.alternative Human tryrotropin expression in human embrionic kidney cells (HEK293) pt_BR
dc.type Dissertação pt_BR
ipen.identifier.ipendoc 22025 pt_BR
sigepi.autor.atividade SANTANA, PATRICIA M.:11266:810:S pt_BR
dc.coverage N pt_BR
dc.creator.author SANTANA, PATRICIA M.
dc.description.notasgerais Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) pt_BR
dc.description.notastese IPEN/D pt_BR
dc.description.teseinstituicao Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP pt_BR
dc.local São Paulo pt_BR
ipen.autor SANTANA, PATRICIA M. pt_BR
ipen.date.recebimento 16-12 pt_BR
ipen.identifier.localizacao T577.17 A231e pt_BR
ipen.meioeletronico http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-05122016-160030/pt-br.php pt_BR
ipen.codigoautor 11266 pt_BR
dc.identifier.doi 10.11606/D.85.2016.tde-05122016-160030


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Autor: Maprelian

Título: loss of coolant

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Ano de publicação: 2015

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A elaboração do projeto do RI do IPEN foi iniciado em novembro de 2013, colocado em operação interna em julho de 2014 e disponibilizado na Internet em junho de 2015. Utiliza o software livre Dspace, desenvolvido pelo Massachusetts Institute of Technology (MIT). Para descrição dos metadados adota o padrão Dublin Core. É compatível com o Protocolo de Arquivos Abertos (OAI) permitindo interoperabilidade com repositórios de âmbito nacional e internacional.

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2. A experiência do Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN-CNEN/SP) na criação de um Repositório Digital Institucional – RDI, clique aqui.

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