Abstract: Apesar dos constantes avanços no tratamento de câncer, essa doença continua sendo umas das principais causas de mortalidade no mundo todo, portanto, é imperativo que novas modalidades de tratamento sejam desenvolvidas. Venenos de serpentes causam uma variedade de efeitos biológicos, pois constituem uma mistura complexa de substâncias como disintegrinas, proteases (serino e metalo), fosfolipases A2, L-aminoácido oxidases entre outras. No presente trabalho pesquisou-se em alguns venenos de serpentes frações com atividade antitumoral, pois há relatos de compostos ofídicos que apresentam esta atividade. Após fracionamento de venenos de serpentes das famílias Viperidae e Elapidae foram feitas incubações das frações obtidas com células normais de fibroblasto L929 e de melanoma B16-F10. Os resultados mostraram que as frações do veneno da serpente Notechis ater niger apresentaram a maior especificidade e potencial antitumoral em células de melanoma murino B16-F10 que os demais venenos utilizados. Este achado, aliado ao fato de ser um veneno pouco explorado foram determinantes para que este veneno fosse selecionado para dar continuidade aos estudos. As frações citotóxicas deste veneno foram submetidas a análises para identificar e caracterizar os componentes que apresentaram esta atividade atitumoral. Ensaios de western-blot e zimografia sugerem que estas proteínas não pertencem à classe das metalo e serinoproteinases.

Palavras-Chave: snakes; venoms; biological repair; proteins; tumor cells; neoplasms; bioassay; boron 16; fluorine compounds; toxicity

QUEIROZ, RODRIGO G. Componentes derivados de venenos de serpentes com ação antitumoral em células de melanoma murino. Orientador: Nanci do Nascimento. 2012. 91 f. Tese (Doutoramento) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2012.tde-24082012-133252. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10114. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Sistemas de liberação controlada vêm sendo cada vez mais utilizados em diferentes áreas tendo em vista sua aplicabilidade que os tornam uma tecnologia capaz de atender as necessidades econômicas e ambientais uma vez que permitem a utilização de princípios ativos em quantidades precisas e apenas nos locais desejados. Dentre a diversidade de opções de matrizes utilizadas nesses sistemas o poli(álcool vinílico) tem sido bastante empregado e pode ser obtido pela técnica de ciclos térmicos. Azadiractina, um princípio ativo encontrado em óleo de semente de Nim tem sido descrita como repelente de diferentes tipos de insetos e apresenta grande aplicabilidade na agricultura. Com base nas propriedades desse composto, propôs-se o desenvolvimento de um sistema de liberação controlada para combate a pulgas Ctenocephalides felis felis. No presente trabalho, foram realizadas caracterizações físico-químicas das matrizes e dispositivos através de ensaios de fração gel, intumescimento, calorimetria exploratória diferencial e microscopia eletrônica de varredura e caracterizações biológicas quanto à citotoxicidade do óleo de Nim, matrizes e dispositivos e bioensaio para análise do comportamento das pulgas na presença do óleo de Nim. As caracterizações físico-químicas permitiram a escolha da matriz mais adequada para o desenvolvimento do dispositivo. As caracterizações biológicas demonstraram ausência de citotoxicidade do óleo de Nim, das matrizes e dos dispositivos e o bioensaio resultou em 40% de mortalidade das pulgas testadas. Na cinética de liberação, verificou-se que todos os agentes encapsulantes utilizados permitiram a liberação de princípios ativos do óleo de Nim.

Palavras-Chave: vegetable oils; trees; pva; insects; insecticides; bioassay; veterinary medicine

ANDRADE, ANDREIA B.N. de. Desenvolvimento de um sistema de liberação controlada de princípios ativos do oleo de Azadirachta indica A. Juss em matriz de poli(álcool vinílico) (PVA) para aplicações em veterinária. Orientador: Ademar Benévolo Lugão. 2013. 94 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2013.tde-04072013-164346. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10522. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Hidrogéis são membranas formadas pela reticulação de cadeias poliméricas, empregados na área farmacêutica como produtos biomédicos. Dentre os principais polímeros selecionados para a síntese de hidrogéis, destaca-se a poliacrilamida (PAAM) devido às suas propriedades como hidrofilicidade e alto grau de intumescimento. Proteínas terapêuticas e enzimas são veiculadas em hidrogéis como carreadores de fármaco ou como dispositivos para tratamento de feridas e escaras na pele. Este trabalho teve como objetivo a síntese de uma membrana à base de PAAM favorável para veiculação de proteínas. As proteínas empregadas foram papaína e albumina de soro bovino (BSA) e as etapas do processo englobaram síntese da membrana, adição das proteínas no sistema, irradiação em condições específicas e caracterização da membrana. Ao utilizar temperaturas criogênicas na síntese e na irradiação das amostras, houve predomínio de reticulação da cadeia polimérica, fato que não ocorria em temperatura ambiente. As membranas foram obtidas com incorporação dos ativos na concentração de 0,2 a 1% (p/p), obtendo-se concentração de PAAM entre 4% a 10% (p/p), as quais receberam irradiação com raios gama provenientes de uma fonte 60Co, na dose de 25 kGy. Nas condições realizadas, as membranas não apresentaram citotoxicidade nem adesão celular, o perfil de liberação das proteínas foi adequado, a papaína manteve sua bioatividade preservada apesar do decaimento biológico e, segundo estudos de carga das moléculas, a membrana possui maior afinidade com a papaína, liberando-a mais lentamente. Desta forma, o método proposto e as membranas obtidas foram apropriados para a obtenção de um biomaterial.

Palavras-Chave: hydrogels; nanostructures; membranes; polymers; nitriles; synthesis; lyophilization; proteins; papain; albumins; cytology; adhesion; cross-linking; electrostatics; toxicity; bioassay; activity levels; gamma radiation

FERRAZ, CAROLINE C. Desenvolvimento de uma membrana nanoestruturada à base de poliacrilamida para veiculação de proteínas. Orientador: Ademar Benévolo Lugão. 2013. 101 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2013.tde-19112013-145148. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10539. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O câncer é uma doença de alta incidência e é considerado um problema de saúde pública no mundo todo. O resveratrol é um polifenol de defesa que tem a habilidade de inibir a carcinogênese em múltiplos estágios. Este polifenol é sintetizado por uma grande variedade de plantas em resposta a exposição à radiação ultravioleta (UV) ou também, pelo estresse mecânico produzido pela ação de patógenos, agentes químicos e físicos. As videiras são consideradas as plantas que têm uma capacidade elevada de produzir o resveratrol, portanto suco de uva e vinho, principalmente o vinho tinto são considerados uma boa fonte de resveratrol. Os efeitos protetores exercidos pelo resveratrol promovem efeitos como indução da resposta antiinflamatória, atividade antitumoral, prevenção ou inibição de doenças degenerativas, diminuição da incidência de doenças cardiovasculares, inibição da agregação plaquetária, entre outros. Assim, o resveratrol é considerado um protetor celular. Porém, em concentrações mais elevadas, o resveratrol promove o efeito contrário, sensibilizando as células a algum tipo de efeito, como por exemplo, o efeito da radiação ionizante. O objetivo desse trabalho foi estudar o efeito radiomodificador do resveratrol em cultura de células RD (rabdomiossarcoma humano) aplicando o teste do cometa para avaliação do dano e capacidade de reparo celular. Foi obtida a DL50 das células RD em 403 Gy e o índice de citotoxicidade do resveratrol (IC50%) nas células RD foi de 150 μM. A partir destes resultados foram definidas as doses de radiação gama (50 Gy e 100 Gy) e as concentrações de resveratrol (15 μM 30 μM 60 μM) que foram analisadas no trabalho. Foram evidenciados os efeitos do resveratrol como protetor celular na concentração de 15 μM e seu efeito citotóxico em 60 μM. Com a interação da radiação gama, a concentração de 60 μM não mostrou efeito radiossensibilizador estatisticamente significante.

Palavras-Chave: carcinogens; polyphenols; inhibition; beverages; grapes; wine; sarcomas; response modifying factors; cell cultures; dna damages; dna repair; comets; bioassay

MAGALHAES, VANESSA D. Efeito radiomodificador do resveratrol em cultura de células de rabdomiossarcoma humano (RD) aplicando o teste do cometa. Orientador: Jose Roberto Rogero. 2012. 70 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2012.tde-29052013-093334. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10187. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) é uma espécie de carrapato presente nos países de clima tropical e parasitam diversos animais de interesse zootécnico, mas predominantemente, bovinos, e que está diretamente envolvido no complexo de doenças chamado de Tristeza Parasitária Bovina, causadas por infecções com Babesia spp, entre outras e, constituindo-se num fator limitante ao desenvolvimento da pecuária nos países tropicais e subtropicais. Assim, com o intuito de se propor uma alternativa para o controle populacional deste parasita, buscou-se avaliar os efeitos da radiação gama do 60Co no aparelho reprodutor das fêmeas por meio das técnicas como o ensaio do cometa e preparação histológica de fixação em hematoxilina e eosina (H-E) e, o bioensaio de encubação das posturas avaliar a taxa de eclodibilidade para aplicações à técnica do inseto estéril. Vinte e cinco fêmeas ingurgitadas em fase de pré postura foram irradiadas com doses de 0, 5, 10, 15, 20 e 25 Gy para ambos os experimentos (5 fêmeas/tratamento) e após 24h foram dissecadas e seus ovários formaram uma amostra. O ensaio do cometa mostrou que o trauma cromossômico foi proporcional às doses da radiação ionizante. Os achados histológicos demonstraram que à dose de 5 Gy teve aspecto morfohistológico semelhante ao controle; doses de 10 e 15 Gy não evidenciaram efetiva desnaturação dos pedicelos ou epitélio dos ovários, contudo, desarranjos das granulações do vitelo e a presença de numerosos vacúolos nos ovócitos, corroboram com a degeneração celular ou autofagia, o que comprometeria a viabilidade dos ovos. Doses de 20 e 25 Gy mostraram efeitos agudos com significativo comprometimento de toda estrutura do aparelho reprodutor comprometendo a postura. No bioensaio as fêmeas também em fase de pré postura foram submetidas às doses de 0 a 400 Gy e se constatou que a radiação ionizante afetou em aproximadamente 70% o peso da postura, a taxa de eclosão dos ovos da Testemunha foi 68,2% maior que a menor dose ionizante, que quanto maior a dose de radiação, menor o índice de eclosões e nos tratamentos que receberam doses maiores de 20 Gy, não ocorreram eclosões das posturas, estabelecendo-se assim um marco para se estudar a aplicação de técnica do inseto estéril neste espécime.

Palavras-Chave: cattle; infectious diseases; hemolysis; ticks; parasites; protozoa; control; population dynamics; females; insect release; sterile male technique; pest control; cobalt 60; gamma dosimetry; radiation doses; biological radiation effects; sample preparation; bioassay; comparative evaluations

PASQUALINI, ALEXANDRE A. Efeitos da radiação ionizante em ovários de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (ACARI: IXODIDAE) em fase de pré postura. Orientador: Valter Arthur. 2020. 59 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2020.tde-17122020-104307. Disponível em: http://200.136.52.105/handle/123456789/31736. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O presente trabalho buscou investigar a formação da placa de aterosclerose através de caracterização da autofluorescência do tecido e do plasma na presença de marcadores fluorescentes. Para realizar o estudo, coelhos foram divididos em dois grupos: um grupo controle onde os animais foram submetidos a uma dieta normal e um grupo experimental onde os animais foram submetidos a uma dieta hipercolesterolêmica. Foram realizadas duas experimentações animais: na primeira os animais foram sendo eutanasiados ao longo do experimento e suas artérias foram coletadas. Na segunda os animais foram acompanhados por no máximo 80 dias. Durante o experimento apenas o sangue foi coletado e os animais foram eutanasiados no final do experimento. Dois marcadores fluorescentes foram utilizados no trabalho: o complexo európio-clorotetraciclina (EuCTc) e o corante tioflavina T (ThT). Analisouse inicialmente a fluorescência dos marcadores na presença do plasma dos coelhos tanto para o grupo controle, quanto para o grupo experimental em função dos tempos de dieta. Para o complexo EuCTc observou-se duas bandas de emissão, com excitação em 400 nm, uma característica da clorotetraciclina, em 515 nm e uma em 617 nm característica do íon európio. A análise da banda do íon európio indicou um incremento da banda de emissão do complexo na presença do plasma do grupo experimental em relação ao grupo controle. Para o corante ThT também foi observado um aumento na banda de emissão em 480 nm, com excitação em 413 nm, para o grupo experimental em comparação com o grupo controle. A potencialidade de utilização do complexo EuCTc e EuCTcMg (EuCTc na presença do íon magnésio) para marcação da placa de aterosclerose nas artérias, foi estudada através da análise de microscopia de fluorescência. Observou-se que a emissão do complexo melhora muito a visualização da placa quando comparada com a autofluorescência. Observou-se, através de microscopia de tempo de vida de fluorescência, que há uma transferência de energia entre os fluoróforos presentes na placa e os complexos EuCTc e EuCTcMg. Essa transferência de energia ocasionou em uma diminuição drástica no tempo de vida de fluorescência dos fluoróforos nessa região. Por fim, estudou-se a geração de segundo harmônico do colágeno na placa de aterosclerose, sendo obtidas diferenças na quantidade e organização do colágeno para os diferentes grupos experimentais.

Palavras-Chave: rats; in vivo; bioassay; labelled compounds; biological markers; europium; tetracyclines; collagen; plasma; diagnosis; radiotherapy; arteriosclerosis; vascular diseases; arteries; emission; fluorescence; fluorescence spectroscopy; microscopy; comparative evaluations

SICCHIERI, LETICIA B. Estudo e caracterização de marcadores ópticos para a aterosclerose. Orientador: Lilia Coronato Courrol. 2016. 145 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2016.tde-06122016-142610. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/26949. Acesso em: $DATA.

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Abstract: A irradiação de alimentos já foi aprovada e vem sendo utilizada em diversos países para aplicações e finalidades de uma ampla variedade de alimentos. Seus benefícios abrangem o aumento do prazo de validade, melhoria de higiene dos alimentos e consequentemente menor deterioração e perdas se comparado com alimentos que não sofrem radiação. Além disto, os alimentos após irradiados apresentam-se seguros em termos nutritivos e de redução de patógenos. Porém, alimentos que contem de médio a alto teor de gordura induzem a formação de um subproduto denominado 2-Alcilciclobutanonas, a qual sabemos que parte destes compostos ingeridos são normalmente excretados através das fezes, porém parte permanece depositada nos tecidos adiposos. Trabalhos realizados com estes compostos anteriormente apresentaram efeitos citotóxicos e genotóxicos em células de cólon. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos citotóxicos realizados em testes de viabilidade celular, testes genotóxicos em micronúcleo e testes mutagênicos com a técnica de Ames em condições experimentais in vitro dos compostos 2-dDCB e 2-tDCB. Para isso, o fígado foi o órgão de escolha para avaliar os possíveis efeitos destes compostos, uma vez que este órgão é geralmente acometido pelo acumulo de gordura. Foram utilizadas três linhagens hepáticas: HepG2, BRL3A e HTC. A análise dos resultados da viabilidade celular, revelou que as 2-dDCBs apresentaram discreto efeito citotóxico na concentração de 500 μM e as 2-tDCBs apresentaram danos baixos a partir de 100 μM e maiores em 500 μM, mostrando ser dose dependentes. Nos resultados de mutagenicidade, os compostos não apresentaram quaisquer efeitos mutagênicos nas concentrações e doses utilizadas, detectados pelo teste de Ames. Por fim, o ensaio de micronúcleo correspondeu às expectativas não demonstrando efeitos genotóxicos na linhagem, doses e tempos testados. Com base nos resultados atingidos, as 2 ACBs podem ser consumidas com relativa segurança, sob a ótica de possíveis efeitos mutagênicos e genotóxicos nas concentrações avaliadas.

Palavras-Chave: food processing; irradiation; biological effects; radiation effects; toxicity; carboxylic acids; organic acids; ketones; liver cells; fat cells; tumor cells; neoplasms; bioassay; immunoassay; in vitro; comparative evaluations

BARBEZAN, ANGÉLICA B. Estudos in vitro da genotoxicidade e citotoxicidade em células hepáticas da formação de 2-alcilciclobutanonas resultantes da irradiação de alimentos que contenham gordura. Orientador: Anna Lucia Casañas Haasis Villavicencio. 2017. 132 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2017.tde-07122017-104438. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/28418. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Uma linhagem celular de CHO, previamente modificada geneticamente pela introdução de cDNA da 2,6 sialiltransferase de rato, gerou, pela primeira vez, um hTSH recombinante com sialilação humanizada (hlsr-hTSH), mais similar ao hormônio nativo, com 61% de ligação de ácido siálico na conformação 2,3 e 39%, na conformação 2,6. O clone mais produtivo, quando submetido à amplificação gênica com 8 M de metotrexato, apresentou um nível de secreção de aproximadamente 2 g de hTSH/106 células/dia, nível este útil para a purificação e caracterização do produto. A massa molecular relativa do heterodímero e das subunidades e do hlsr-hTSH purificado, determinada por espectrometria de massa MALDI-TOF, e a hidrofobicidade relativa, determinada por RP-HPLC, não apresentaram diferenças significativas com relação às preparações de hTSH recombinante derivadas de células CHO sem a modificação devida ao gene da 2,6 sialiltransferase. Entretanto, algumas diferenças foram observadas na composição dos N-glicanos, com mais estruturas tri- e tetra-sialiladas no hlsr-hTSH. O hlsr-hTSH mostrou-se eqüipotente (p>0,05) à preparação comercial de r-hTSH (Thyrogen) e 1,5 vezes mais potente do que a preparação nativa de hTSH (p<0,001), quando analisado por um bioensaio in vivo baseado na capacidade do TSH de estimular a liberação de T4.

Palavras-Chave: rats; thyroid hormones; tsh; trh; mammals; cho cells; cell cultures; bioassay; in vivo

DAMIANI, RENATA. Expressao estavel de tireotrofina humana (r-hTSH) em celulas de mamifero (CHO) que expressam 'alfa'2,6-sialiltransferase. Orientador: Maria Teresa de Carvalho Pinto Ribela. 2009. 80 f. Dissertacao (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, Sao Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2009.tde-06112009-143353. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/9436. Acesso em: $DATA.

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Abstract: A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença infecciosa de carater sistêmico. Estima-se que 350 milhões de pessoas no mundo estão expostas ao risco de infecção, com uma prevalência de 12 milhões de infectados e letalidade mundial de 59.000 casos por ano (OMS), sendo que 90%dos casos de LV ocorrem em países onde existe grande parte da população em situação de pobreza.Na América Latina a maioria dos casos ocorre no Brasil (96%) com média de 3.500 casos/ano. As áreas de maior endemia encontram-se nas regiões mais carentes do Norte e Nordeste.A donça afeta animais e o homem, podendo levar ao óbito em 100% dos casos, tendo como seu principal vetor a Lutzomyia longipalpis e como agente etiológico, a Leishmania Infantum. O Estado do Tocantins apresenta elevado número de casos autóctones, e é considerada área endêmica pelo Minisério da Saúde devido a doença estar presente na maioria dos seus municípios. A cidade de Araguaína, com 55,8% dos casos do Tocantins, é classificada pelo Ministério da Saúde como área de transmissão intensa.O objetivo geral deste trabalho foi analisar casos confirmados de Leishmaniose visceral grave CID-B55 internados no Hospital de Doenças Tropicais do Tocantins (HDT), na cidade de Araguaína - TO que evoluíram para óbito no periodo de janeiro de 2002 a dezembro de 2015. Pretendeu-se identificar e descrever dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais, e variáveis relacionadas ao tratamento. Foi feito um estudo epidemiológico, observacional, retrospectivo, descritivo, utilizando dados secundários de prontuários médicos de pacientes internados, no Hospital de Doenças Tropicais do Estado do Tocantins, na cidade de Araguaína - TO. Resultados: sexo masculino, 60,8 e 39,2% sexo feminino. 49,2% idade entre 0 e 10 anos; 20% maiores de 51 anos. Local de procedência em relação ao município 40,9% são de Araguaína; e ao Estado a 89% são do Tocantins. Presença de febre em 70,8%; esplenomegalia e hepatomegalia 76,7%. Hemoglobina < 7g/dl 50%, plaquetopenia 76,7%;leucopenia 50% e hipoalbuminemia 84,9%.Tempo de febre até a internação > que 30 dias 30,8%; Tempo de diagnóstico 5,1 dias; tempo de diagnóstico ao óbito 11,6 dias; RIFI 1/80 em 53,3%; Teste Rápido positivo 88,2% droga de escolha para tratmento foi Glucantime 43% seguida por anfotericina 32% e anfotericina lipossomal 25%. A principal causa do óbito na DO(Declaração de aÓbito) foi kalazar 33,3% e também Infecções respiratorias 31,7%.Conclui-se que a maior incidencia ocorre em individuo do sexo masculino menores de 10 anos, residentes no Estado do Tocantins, apresentando quadro febril prolongado, anemia severa e hipoalbuminemia grave, podendo este quadro ter influenciado na evolução ao óbito.

Palavras-Chave: parasites; diseases; disease vectors; epidemiology; etiology; immunoassay; bioassay; inspection; feasibility studies; testing; validation; evaluated data; comparative evaluations; brazil

SOUSA, MARIA A.S. de. Fatores associados à mortalidade na Leishmaniose visceral grave em Araguaína - TO: Caracteristicas epidemiológicas, clínicas e laboratoriais (2002 a 2015). Orientador: Nanci do Nascimento. 2016. 88 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2017.tde-07042017-093151. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/27878. Acesso em: $DATA.

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