Abstract: Staphylococcus aureus é um dos principais microorganismos causadores de infecção em humanos, podendo causar inclusive bacteremia e endocardite nos indivíduos infectados. Diversas cepas desta bactéria apresentam resistência a diferentes tipos de antibióticos, dentre eles os antibióticos meticilina e amoxicilina, como no caso da bactéria Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA). A Proteína ligadora de Penicilina 2a (PBP2a) é a enzima responsável por conferir resistência para a MRSA aos antibióticos β-lactâmicos, sendo uma molécula promissora para terapia com AcM. No entanto, além das terapias os métodos de diagnóstico também são ineficientes, pois atualmente o diagnóstico leva vários dias para produzir um resultado confiável. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um radiofármaco utilizando o AcM anti-PBP2a, desenvolvido em Bio-Manguinhos/FioCruz, marcado com 99mTc, para identificação in situ do foco infeccioso causado por MRSA. Neste trabalho, incialmente o AcM anti-PBP2a foi reduzido com o agente redutor 2-mercaptoetanol (2-ME), para gerar grupos sulfidrilas (- SH). Logo após foram utilizados dois diferentes métodos da Marcação Direta: o Método 1, utilizando o reagente tartarato e o ácido gentísico, que atuam como agente transquelante e estabilizador, respectivamente; e o Método 2, utilizando um kit comercial de MDP, no qual o MDP atua como agente transquelante. Após a marcação do anticorpo, o radiofármaco foi submetido a ensaios de avaliação funcional, utilizando os métodos de eletroforese em gel SDS-PAGE não redutor; Immunoblotting; ELISA e o Ensaio de Neutralização in vitro. Como resultado foi visto que a quantidade média de grupos sulfidrilas produzida por AcM foi considerada satisfatória, cerca de 5 grupos SH por IgG, utilizando para isto a relação molar de 6.500:1 de 2-ME:AcM. O Método 2 foi o método que obteve melhor rendimento de marcação, com 73,5%, apresentando boa estabilidade depois de 2 horas (73,2%). A melhor formulação utilizada foi a seguinte: 0,5 mg de AcM anti-PBP2a; 10 μL do kit do MDP, depois de ser resuspendido com 5 mL de solução salina; e 75,48 MBq (2,04 mCi) de 99mTc, a reação ocorrendo em 15 minutos. Os Ensaios de Avaliação Funcional demonstraram que o AcM manteve a especificidade e afinidade de ligação à PBP2a.

Palavras-Chave: staphylococcus; microorganisms; labelling; monoclonal antibodies; technetium 99

MORORO, JANIO da S. Estudo de marcação do anticorpo monoclonal anti-PBP2a com sup(99m)Tc. Orientador: João Alberto Osso Junior. 2012. 127 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2012.tde-06032013-151412. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10164. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Receptores para somatostatina são amplamente expressos por vários tumores, especialmente os de origem neuroendócrina. Imagens in vivo destes tumores usando análogos da somatostatina radiomarcados tornaram-se uma ferramenta clínica útil em oncologia. O radiofármaco de uso consagrado para este método diagnóstico é o octreotídeo-[D-Phe1-DTPA-111In]. Entretanto, o uso do índio-111 (111In) sofre limitações devido à produção no ciclotron ser limitada, a meia-vida física longa e alta energia gama, resultando em alta dose de radiação ao paciente e características de imagem subótimas. O tecnécio-99m (99mTc), produzido por um gerador de radioisótopo e viabilidade diária, com meia-vida de seis horas e emissão de raios gama de 140 keV, possui características ideais para procedimentos de imagens em medicina nuclear. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um radiofármaco de tecnécio-99m baseado em peptídeo derivado da somatostatina, o octreotídeo, destinado ao diagnóstico de tumores neuroendócrinos em medicina nuclear. A marcação pelo método indireto envolveu a adição de 20 g do peptídeo OCT-HYNIC (octreotídeo-[Tyr3]-HYNIC), 10 mg do coligante EDDA, 20 mg do coligante tricina, aproximadamente 1110 MBq (30 mCi) de pertecnetato de sódio e 15 g do agente redutor SnCl2.2H2O em pH final 6,5, incubando-se em banho de água em ebulição por 10 minutos. O controle de qualidade radioquímico para determinar a pureza radioquímica da marcação foi realizado 30 minutos e 5 horas após marcação pelo método de cromatografia em camada delgada ascendente, utilizando como fases móveis metanol:acetato de amônio (1:1), metiletilcetona e tampão citrato de sódio 0,1 N pH 5,0, e como fases estacionárias as fitas de sílica gel (TLC-SG e ITLC-SG). Esta marcação tida como padrão, resultou numa pureza radioquímica de marcação de 89,91 4,82 % aos 30 minutos e 91,37 6,14 % em 5 horas. Estudando-se os parâmetros de marcação: massa dos coligantes, agente redutor e peptídeo, tempo e temperatura de reação, pH final de marcação e atividade, o melhor resultado obtido foi de 92,14 0,30 % aos 30 minutos e 90,60 0,35 % em 5 horas para uma massa de 80 g de octreotídeo-HYNIC, 10 mg de EDDA, 20 mg de tricina, 150 g de SnCl2.2H2O em pH final de marcação 8,0, numa atividade de até 3700 MBq (100 mCi). Essa formulação seria uma alternativa para a administração de mais de um paciente por marcação a partir da elaboração de um reagente liofilizado. A biodistribuição realizada por método invasivo nos intervalos de 1,5 e 4 horas após administração intravenosa do radiofármaco em camundongos Swiss avaliou a porcentagem da atividade administrada presente no sangue e nos diversos órgãos. Os dados de biodistribuição em camundongos Swiss e Nude com tumor de células AR42J (adenocarcinoma de pâncreas de rato) foram compatíveis com a distribuição do peptídeo marcado: rápido clareamento sangüíneo, alta captação nos rins devido à eliminação do peptídeo pelo trato urinário e alta captação em órgãos com alta densidade de receptores para somatostatina como pulmão, estômago, pâncreas e tumor no caso dos camundongos Nude. A captação do peptídeo radiomarcado na região abdominal não foi significativa, o que representa uma vantagem relativa ao diagnóstico de tumores neuroendócrinos, comuns nesta região. Os resultados de marcação e biodistribuição descritos neste estudo determinaram o potencial do peptídeo marcado com 99mTc para uso em diagnóstico em medicina nuclear.

Palavras-Chave: labelling; technetium 99; in vitro; neoplasms; endocrine diseases; somatostatin

MELERO, LAURA T.U.H. Preparacao de padronizacao de metodologia de marcacao 'in vitro' e estudo de biodistribuicao do octreotideo-[Tyrsup(3)]-HYNIC/EDDA/TRICINA-[sup(99m)Tc]. Orientador: Elaine Bortoleti de Araujo. 2008. 135 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, Sao Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2008.tde-21092009-172049. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/11779. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O desenvolvimento de moléculas radiomarcadas com alta especificidade para um órgão ou tumor tem contribuído para a obtenção de um diagnóstico de precisão em medicina nuclear.Um caso particular são os peptídeos radiomarcados para a localização de tumores neuroendócrinos como os derivados sintéticos da somatostatina.Atualmente, o DTPA-octreotideo-111In é o radiofármaco mais utilizado com o propósito de visualizar tumores que expressem receptores para somatostatina. Contudo, o uso do indio-111 como radionuclídeo oferece limitações em relação a sua disponibilidade (produto de ciclotron), suas características físicas como meia-vida (67 horas) e emissor de fótons de média energia (171 keV e 245 keV) que não favorecem a obtenção de imagens tipo SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography). As propriedades físicas favoráveis do tecnécio-99m (99mTc) fazem dele o radioisótopo mais adequado para substituir o indio-111 (111In) na marcação desses peptídeos. Este trabalho avaliou a preparação e marcação do reagente liofilizado HYNIC-Tyr3-octreotato (HYNIC-octreotato) com 99mTc, baseado em metodologia descrita na literatura, utilizando tricina e EDDA (ácido etilenodiaminadiacetico) como coligantes. Foram estudados os parâmetros de marcação (tempo de incubação, temperatura, volume e atividade do pertecnetato de sódio) e estabilidade do liofilizado. Adicionalmente, estudou-se a influência de pré-congelamento com nitrogênio (N2) líquido na estabilidade do liofilizado, bem como a influência de manitol na pureza radioquímica e biodistribuição do complexo. Os estudos de estabilidade revelaram que o método de liofilização utilizado, empregando o pré-congelamento com nitrogênio líquido possibilitou a obtenção de um reagente liofilizado com estabilidade de 4 meses quando armazenado sob refrigeração. A estabilidade do reagente liofilizado obtido sem pré-congelamento com nitrogênio líquido foi semelhante à obtida com o pré-congelamento.Os estudos de marcações determinaram as melhores condições de marcação, para as quais se obteve pureza radioquímica maior que 90%.A presença de manitol na formulação não influenciou na formação do complexo HYNIC-Octreotato-99mTc, conforme avaliação realizada por CLAE e estudos cintilográficos de distribuição do composto em coelhos.Estudos de biodistribuição invasivos realizados em camundongos Nude com tumor (células AR42J de tumor pancreático) e camundongos Swiss normais, bem como estudos cintilográficos realizados em coelhos e camundongos Nude revelaram cinética de distribuição rápida, acúmulo renal e captação tumoral significativa do peptídeo radiomarcado. Os resultados dos estudos de marcação com 99mTc, produção de reagente liofilizado e biodistribuição sugerem que o radiofármaco HYNIC-octreotato-99mTc apresenta potencial para aplicação em diagnóstico de tumores neuroendócrinos em medicina nuclear.

Palavras-Chave: labelling; tracer techniques; radiopharmaceuticals; technetium 99; nervous system diseases; endocrine diseases; endocrine diseases; neoplasms

MELO, IVANI B. Preparo do reagente liofilizado HYNIC-[Tyrsup(3)]-octreotato e estudo de marcacao com tecnecio-99m. Orientador: Constancia Pagano Goncalves da Silva. 2008. 106 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, Sao Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2008.tde-11112008-102835. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/11726. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O 123I e 131I são dois radioisótopos de iodo amplamente utilizados em medicina nuclear. O 123I é utilizado para diagnóstico através da técnica de SPECT e produzido no IPEN em cíclotron a partir da reação 124Xe (p,2n)123Cs->123Xe-> 123I. Já o 131I pode ser utilizado tanto para o diagnóstico quanto para o tratamento devido às suas características físicas de decaimento β- e sua elevada emissão de raios-γ. Sua produção no IPEN é realizada utilizando um reator nuclear a partir da reação indireta: 130Te(n, γ)->131Te->131I, onde são irradiados alvos contendo Te. Os radiofármacos preparados com estes radioisótopos passam por um rigoroso controle de qualidade onde a pureza química dos radioisótopos primários 123I e 131I está dentro dos limites estabelecidos atualmente. Entretanto, a presença de alguns contaminantes químicos prejudica a marcação de biomoléculas (anticorpos monoclonais e peptídeos) que produziriam radiofármacos de primeira geração para a área de oncologia. Com isso, o objetivo deste trabalho consiste na obtenção de um método de purificação dos radionuclídeos 123I e 131I para uma maior eficiência na marcação de biomoléculas, estabelecendo também controle do processo nos métodos de produção destes radioisótopos. A metodologia foi dividida em 3 etapas: Determinação da pureza radionuclídica através da análise de amostras de 123I e 131I no detector de germânio-hiperpuro (HPGe), determinação da pureza química de 123I e 131I através da técnica de ICP-OES e análise do comportamento de 131I em diversos adsorvedores para posterior utilização dos adsorvedores mais adequados para os testes de purificação, analisando o comportamento dos possíveis contaminantes. Quanto a pureza radionuclídica, pode-se observar a presença de radionuclídeos de Te e Co nas amostras de 131I e radionuclídeos de Te, Tc e Co para 123I. A análise de pureza química determinou a presença principalmente de Al e Mo nas amostras de 123I, provenientes do material do porta-alvo e da janela do porta-alvo e Al e Te nas amostras de 131I, provenientes da cápsula de Al utilizada na irradiação e do alvo, respectivamente. O estudo de retenção e eluição de 131I selecionou os meios adsorvedores mais promissores para sua purificação, no caso a resina catiônica Dowex 50WX4 que apresentou excelente eluição de 131I e retenção das impurezas radionuclídicas presentes em sua solução.

Palavras-Chave: radiopharmaceuticals; labelling; iodine 123; iodine 131; purification

CATANOSO, MARCELA F. Purificação de sup(123)I e sup(131)I para marcação de biomoléculas. Orientador: João Alberto Osso Junior. 2011. 98 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2011.tde-15092011-144958. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10025. Acesso em: $DATA.

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