Abstract: A baixa seletividade dos métodos convencionais para diagnóstico e terapia de neoplasias, bem como o fato de nem sempre alcançarem o sucesso terapêutico desejado, configuram dificuldades para a prática oncológica. Diante disso, os anticorpos monoclonais (AcMs) radiomarcados, aplicados em técnicas diagnósticas, têm se destacado, visto que permitem a entrega seletiva da radiação ao alvo de interesse. A metodologia Radioimunodiagnóstico (RID), utilizando AcM anti-EGFR radiomarcado, possibilita triagem prévia, avaliando a resistência ao tratamento e estratificando pacientes que possam apresentar benefícios à imunoterapia com cetuximabe. Além disso, permite monitorar a progressão da terapia, visando tratamento mais efetivo e direcionado, promulgando a abordagem da medicina personalizada. No Brasil, ainda não há radioimunoconjugado disponível para diagnóstico e seguimento do câncer. Nesse contexto, o objetivo com este trabalho foi o de desenvolver uma formulação farmacêutica para padronizar uma rotina de produção dos radiofármacos para radioimunodiagnóstico de câncer de cabeça e pescoço e de câncer colorretal: cetuximabe-DTPA-111In e cetuximabe-DFO-89Zr. Em adição, corroborar na elucidação dos mecanismos de resistência das células tumorais à terapia com o cetuximabe, através da realização de estudos de ligação do radioimunoconjugado à receptores celulares. Em relação aos radiofármacos estudados, destaca-se que os processos de conjugação do cetuximabe com os quelantes DTPA, na razão molar 1:20, e com o DFO, 1:5, foram bem-sucedidos e otimizados, demonstrando boa reprodutibilidade. Os imunoconjugados apresentaram preservação da imunorreatividade e alta estabilidade quando armazenados a -20°C por até seis meses. Esses imunoconjugados, quando radiomarcado com 111In e 89Zr, exibiram pureza radioquímica superior a 95%, sem necessidade de purificação pós-marcação, e estabilidade por tempo que possibilita seu transporte às clínicas distantes do centro produtor. As análises in vitro do cetuximabe-DTPA-111In em células FaDu-C10 (linhagem resistente) demonstraram percentual inexpressivo de ligação e internalização do radioimunoconjugado, congruindo na explanação do modelo de resistência conferido à linhagem. O estudo de corpo inteiro em MicroPET/TC revelou redução no perfil de captação no grupo de bloqueio, com excesso de cetuximabe não marcado, e intensa captação do cetuximabe-DFO-89Zr pelo tumor de células escamosas no grupo sem bloqueador, confirmando a especificidade in vivo do radioimunoconjugado. Os estudos de biodistribuição dos radiofármacos foram compatíveis com os descritos em literatura e validaram os resultados obtidos por imagens em MicroSPECT/TC e MicroPET/TC, além de apresentarem apreciável captação tumoral, considerando os tempos analisados. A estabilidade alta in vivo e a eficácia da marcação foram confirmadas pela baixa captação óssea e em tecidos não alvos. O melhor intervalo pós-injeção do radiofármaco para avaliação in vivo foi após cinco dias da administração. Conclui-se, portanto, que os radioimunoconjugados para imuno-SPECT e imuno-PET, cetuximabe-DTPA-111In e cetuximabe-DFO-89Zr, são ferramentas promissoras para diagnóstico e monitoramento de câncer receptor específico (EGFR) e para estratificação de pacientes à terapia anti-EGFR, encorajando a continuidade deste projeto para futuros estudos clínicos.

Palavras-Chave: porins; membrane proteins; membrane transport; epidemiology; immunity; inspection; antibody formation; immunoassay; labelling; in vivo; in vitro; indium 111; zirconium 89; radiopharmaceuticals; process control; radiotherapy; diagnosis; neoplasms; neck; head; large intestine; carcinomas; preventive medicine; health hazards; single photon emission computed tomography; positron cameras

BENEDETTO, RAQUEL. 89Zr-Imuno-PET/111In-Imuno- SPECT: desenvolvimento radiofarmacêutico de agentes de imagem molecular para receptores EGF. Orientador: Elaine Bortoleti de Araújo. 2017. 200 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2018.tde-16022018-150129. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/28620. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O aumento da incidência de câncer tem sido expressivo nas ultimas décadas na população mundial, sendo confirmada segundo previsões de entidades nacionais e internacionais da área da saúde. O surgimento do câncer é influenciado predominantemente por fatores genéticos e ambientais, sendo manifestado com mais intensidade na população adulta. As principais modalidades para tratamento do câncer (radioterapia, quimioterapia e cirurgia) podem ser usadas individualmente ou em combinação, dependendo do tipo de câncer. Entre as modalidades citadas, a radioterapia é aquela com maior abrangência no tratamento de pacientes, tendo associado um efeito colateral denominado radiodermite que possui graus de severidade que variam de um simples eritema até radionecrose. As manifestações da radiodermite poderão ocorrer durante o tratamento ou após as seções de radioterapia, ambas as situações terão grande relevância na qualidade de vida do paciente e no custo social. Uma das terapias alternativas estudadas para atenuar a radionecrose é a aplicação cutânea de quercetina. Para avaliar a efetividade desta atenuação foi elaborado um modelo animal de radionecrose a ser utilizado em ratos Wistar. Após estudos in vitro, foi possível determinar as concentrações e momento de aplicação da quercetina, redundo o número de animais a serem utilizados nos experimentos in vivo. Com a aplicação tópica de 250 mol/L de quercetina, uma hora antes da irradiação gama com dose de 85 Gy, foi possível minimizar os efeitos secundários da radiação, evitando a formação de radionecrose e uma tendência de atenuar a área da ferida nos animais estudados, em comparação aos animais irradiados sem a aplicação da mesma.

Palavras-Chave: organic compounds; radiotherapy; quercetin; gamma radiation; irradiation; in vitro; rats; tissue cultures; necrosis; radiodermatitis; local radiation effects; radiation injuries; healing

ALVES, NELSON M. Atenuação da radionecrose em ratos Wistar com aplicação cutânea de quercetina. Orientador: Monica Beatriz Mathor. 2016. 105 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2016.tde-18032016-093140. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/26607. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Anexina A5 (ANXA5) é uma proteína intracelular humana de 36kDa com alta afinidade pela fosfatidilserina que é seletivamente externalizada na superfície de células apoptóticas. A apoptose apresenta um papel importante na fisiologia normal e em numerosos estados patológicos. A aplicação clínica da ANXA5 em imagem da apoptose tem sido desenvolvida em oncologia, transplante de órgãos e doenças cardiovasculares. Várias estratégias para radiomarcação da proteína têm sido descritas, incluindo marcação direta, derivatização com quelante bifuncional (BFC), produção de proteína mutante ou peptídeos análogos. Muitas técnicas de marcação com 99mTc têm sido descritas utilizando diferentes núcleos, tais como [Tc=O]+3, [99mTc]HYNIC, [TcºN]+2 e [Tc(CO3)]+1. Neste estudo, avaliamos a influência do núcleo de 99mTc no comportamento biológico e propriedades físico-químicas da anexina radiomarcada. A radiomarcação utilizando o núcleo [TcºN]+2 foi realizada em duas etapas incluindo a reação do 99mTcO4 - com SDH na presença de SnCl2 e PDTA para obter o intermediário 99mTcN-SDH, seguida da adição de ANXA5. Os resultados obtidos não estão em acordo com a literatura, apesar da alta eficiência na produção do intermediário. O núcleo [Tc=O]+3 foi produzido usando a etilenodicisteina 7 (EC) como BFC. Para derivatização empregou-se o TSTU para obter o éster succinato correspondente. Diferentes razões de ANXA5:EC foram estudadas e todas as condições de marcação resultaram em alta pureza radioquímica, porém diferenças foram observadas na lipofilicidade, estabilidade, distribuição biológica e afinidade por células apoptóticas. A ANXA5-HYNIC também produziu a proteína radiomarcada com alta pureza radioquímica. A estabilidade das ANXA5 radiomarcadas foi avaliada após incubação à temperatura ambiente, a 28°C e em incubação em soro humano a 37°C. A análise destes resultados demonstrou que a ANXA5- EC-99mTc (razão 10-2) foi o composto mais estável em todas as condições estudadas. O ensaio de coeficiente de partição demonstrou que os compostos do EC apresentam uma menor lipossolubilidade em relação a ANXA5-HYNIC-99mTc. A atividade biológica das anexinas radiomarcadas foi avaliada em células PC-3 com apoptose radioinduzida demonstrando que a ANXA5-EC-99mTc (razão 10-2) foi a proteína com maior porcentagem de ligação específica. A biodistribuição in vivo das anexinas radiomarcadas demonstrou uma alta captação na região abdominal, especialmente para a ANXA5-HYNIC-99mTc. Os resultados indicam que ANXA5-EC-99mTc (razão 10-2) pode ser uma alternativa atrativa para o uso da ANXA5-HYNIC-99mTc em imagem de receptores de fosfatidilserina.

Palavras-Chave: technetium 99; radiopharmaceuticals; labelling; computerized tomography; biological radiation effects; chemical properties; physical properties; in vitro; in vivo; proteins

SANTOS, JOSEFINA da S. Avaliacao da radiomarcacao da enexina A5 com tecnecio-99m: influencia do metodo de marcacao nas propriedades fisico-quimicas e biologicas do composto. Orientador: Elaine Bortoleti de Araujo. 2009. 146 f. Tese (Doutoramento) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, Sao Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2009.tde-17112009-151849. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/9462. Acesso em: $DATA.

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