Abstract: O melanoma é classicamente descrito como um dos tumores que possuem alta radioresistência, tanto em experimentos in vitro quanto em estudos clínicos. O óxido nítrico é uma molécula que exerce diversas funções no organismo e interage com vias que podem alterar o microambiente tumoral, incluindo a radioresistência. O presente estudo tem o objetivo de avaliar o papel do óxido nítrico (ON) como radiomodificador na linhagem celular de melanoma humano, SK-MEL-37, em culturas irradiadas com radiação gama (60Co) em doses entre 0,5 e 16 Gy. As culturas receberam tratamentos prévios com L-NAME (N(ω)-nitro-L-arginina metil éster) um inibidor da óxido nítrico sintase (NOS) ou com nitroprussiato de sódio (NPS), um doador de nitrogênio. O ensaio de frequência de micronúcleos mostrou que a concentração de 500 μM de NPS tornou as células mais sensíveis aos efeitos das radiações ionizantes e manteve o ritmo do ciclo celular sem alterações significativas até a dose 8 Gy. O tratamento realizado com 60 μM de NPS protegeu a cultura celular provavelmente por reduzir a velocidade do ciclo celular, apesar de induzir maior dano genotóxico. A inibição do ON provocada pela concentração de 6,4 μM de L-NAME tornou a cultura celular mais radioresitentes refletindo em uma menor frequência de dano genotóxico. Os dados obtidos mostraram que o aumento ou a redução da concentração de óxido nítrico nas culturas in vitro de SK-MEL-37 podem conferir radioresistência ou sensibilidade por mecanismos distintos.

Palavras-Chave: neoplasms; melanomas; tumor cells; cell constituents; cell cultures; cell flow systems; cell membranes; radiosensitivity; radioreceptor assay; bioassay; biological models; nitrogen oxides; sodium; radiotherapy; ionizing radiations; animal tissues; in vitro; effective radiation doses; dosimetry

BONFIM, LETICIA. Avaliação do efeito de um inibidor da óxido nítrico sintase (L-NAME) e de um doador de radicais de nitrogênio (NPS) na citotoxicidade, genotoxicidade e potencial clonogênico de culturas celulares de melanoma humano (SK-MEL-37). Orientador: Daniel Perez Vieira. 2019. 83 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2019.tde-24102019-160440. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/30314. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O câncer de pele pode ser do tipo melanoma ou não melanoma, sendo comum em pessoas acima de 40 anos, de pele clara ou com doenças cutâneas prévias. A incidência do melanoma é baixa, porém, é considerado o mais agressivo e mortal devido ao seu alto poder metastático. A cirurgia ainda é a forma de tratamento mais empregada para a doença, sendo muito invasiva e, portanto, terapias coadjuvantes estão sendo empregadas a fim de melhorar a qualidade de vida dos pacientes, como o laser de baixa potência (LBP). Sabe-se que o LBP pode desencadear efeito bioestimulatório em culturas celulares crescidas sob déficit nutricional, porém em linhagens tumorais sua ação é controversa. Dessa forma, o objetivo desse estudo consiste em investigar os efeitos inibitórios do LBP no comportamento de células de melanoma murino B16F10 e humano SKMEL 37 utilizando um laser de emissão infravermelha (λ = 780 nm) com diferentes densidades de energia. Foram adotados 4 grupos experimentais: G0 (grupo controle), G30 (30 J.cm-2), G90 (90 J.cm-2) e G150 (150 J.cm-2) a fim de verificar a viabilidade celular, através do ensaio de MTT e vermelho neutro; o comportamento de invasão celular, obtido através do ensaio de invasão transwell; e o papel do LBP na expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), verificado através do ensaio imunoenzimático ELISA. Os resultados mostraram que a densidade de energia de 30 J.cm-2 estimulou o comportamento de invasão da linhagem celular B16F10. Por outro lado, o LBP não exerceu influência na expressão do fator de crescimento endotelial vascular, na viabilidade celular, e na atividade mitocondrial de ambas as linhagens celulares, em nenhuma das densidades de energia utilizadas, em comparação ao controle.

Palavras-Chave: neoplasms; melanomas; animal cells; reticuloendothelial system; protein engineering; blood vessels; mitochondria; cardiovascular system; skin diseases; infrared radiation; lasers; low level counting; biological effects

CONTATORI, CAROLINA G. de S. Efeitos do laser de baixa potência de emissão infravermelha (λ=780nm) em células de melanoma murino e humano. Orientador: Martha Simões Ribeiro. 2019. 74 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2019.tde-30072019-132516. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/30154. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Diversos estudos de serpentes têm mostrado que algumas substâncias componentes de seus venenos possuem eficiência na atividade antitumoral nos ensaios realizados em laboratório em células in vitro e in vivo. O veneno da cascavel Crotalus vegrandis possuem atividades neurotoxica, miotoxica e hemorrágica. A crotoxina simile é um importante componente desse veneno sendo formada por uma proteína que possui uma unidade ácida (Crotapotina) ligada a uma subunidade básica (PLA2). Devido ao fato de existirem poucos estudos relativos ao veneno de Crotalus vegrandis, torna-se necessário o isolamento e a caracterização de suas biomoléculas e uma maior investigação do seu potencial e sua eficácia como agente terapêutico contra células tumorais. No presente trabalho, foi realizado o isolamento e a caracterização da crotoxina simile de Crotalus vegrandis, bem como seu efeito citotóxico em células L929 e B16F10. Realizou-se o cultivo dessas células em placas com 96 poços, para, então, serem colocadas em contato direto com diferentes frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis por um tempo total de 48 horas. Para efeitos de comparação realizou-se o mesmo ensaio com frações do veneno purificado da cascavel brasileira Crotalus durissus terrificus. Para a avaliação da viabilidade celular o tratamento com as frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis e Crotalus durissus terrificus, realizou-se os ensaios com MTT. Os resultados mostraram uma atividade de grande toxicidade para ambos os venenos em células tumorais B16F10 e pouca toxicidade para as células normais L929. Ainda nos ensaios comparativos com os dois venenos, verificou-se que, para uma dada concentração, as frações do veneno de Crotalus vegrandis possuem uma maior eficiência que qualquer concentração do veneno de Crotalus durissus terrificus, havendo uma maior especificidade para as células B16F10. A crotoxina símile isolada do veneno de Crotalus vegrandis apresentou atividade citotóxica mais preponderante na linhagem celular tumoral B16F10, após 48 horas concentrações de 250 e 125 ug/mL.

Palavras-Chave: therapy; high-performance liquid chromatography; tumor cells; melanomas; neoplasms; venoms; snakes; toxins; acid proteinases; hydroxy compounds; glycerol; antipyretics

NISHIMURA, PAULA J. Isolamento e caracterização da crotoxina símile do veneno de Crotalus vegrandis com atividade antitumoral. Orientador: Patrick Jack Spencer. 2016. 77 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2016.tde-14072016-135252. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/26613. Acesso em: $DATA.

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Abstract: O melanoma maligno é um tipo de câncer com grande risco de produzir metástases e com altas taxas de mortalidade resultantes de diagnósticos tardios e falta de tratamentos eficazes. Ao longo dos últimos anos, a terapia gênica voltada para o câncer e o desenvolvimento de métodos capazes de visualizar processos moleculares e celulares ao longo da terapia, tem recebido especial atenção. Diante deste quadro, nossos objetivos foram utilizar o sistema de Tomografia por Emissão de Pósitrons (PET) para diagnosticar precocemente tumores e investigar a eficácia terapêutica de uma nova imunoterapia em um modelo animal de melanoma metastático. Visando atingir esses objetivos, padronizou-se a síntese e realizou-se o controle de qualidade do 9- [4-18F-fluoro-3-hidroximetil-butil) guanina, [18F] FHBG, considerado o padrão-ouro em estudos clínicos, para acompanhamento de terapia gênica por PET. Métodos: Sintetizou-se o [18F] FHBG, por substituição nucleofílica tipo 2 do precursor tosilato com [18F-] fluoreto de potássio /Kryptofix 2.2.2, seguido de desproteção com HCl 1 M e purificação por HPLC. A identidade química, pureza radioquímica e atividade específica do [18F] FHBG foram determinadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Introduziu-se o gene de timidina quinase (TK) com o vetor retroviral pCL-TK nas linhagens B16F10 (melanoma murino) e LLC (carcinoma de pulmão murino). Os estudos de captação in vitro dos radiotraçadores [18F] FHBG e [18F] FDG foram realizados nas linhagens celulares tumorais murinas transduzidas ou não com a proteína TK. Para os estudos in vivo, camundongos C57BL6 previamente inoculados intravenosamente com células de melanoma expressando a enzima TK, foram imageados subsequentemente utilizando os radiotraçadores [18F] FDG e [18F] FHBG. A eficácia da imunoterapia foi testada em modelo profilático e terapêutico animal de melanoma metastático. Resultados: O tempo de síntese total do [18F] FHBG variou entre 80-150 minutos. O rendimento radioquímico variou entre 1-4%, (n = 19) decaimento corrigido. A pureza radioquímica foi superior a 99% e a atividade específica variou entre 0,14GBq/μmoL-0,21GBq/μmoL. Com a introdução do gene timidina quinase (TK), obtiveram-se as linhagens repórter B16F10-TK e LLC-TK, para os estudos in vitro. As células B16F10 e LLC, expressando GFP foram utilizadas como linhagens controles. Estudos in vitro com o [18F] FHBG revelaram uma captação cerca de 4 vezes maior em células que expressam TK (B16-TK e LLC-TK) em comparação com as células controle GFP. O [18F] FDG apenas captou cerca de duas vezes mais em células TK do que em células que expressam GFP. A detecção de tumores em modelo animal de metástase pulmonar com o [18F] FDG ocorreu a partir de 15 dias do estabelecimento das lesões. No entanto, nos estudos in vivo com [18F] FHBG, houve captação apenas na região intestinal, durante as três semanas em que os animais foram acompanhados. A imunoterapia com células tratadas pela combinação de p19Arf e IFNβ, em camundongos C57BL6 com metástase pulmonar, conferiu redução do tamanho dos focos metastáticos aos animais tratados. Conclusões: Neste trabalho padronizou-se a síntese manual do [18F] FHBG, o qual foi avaliado em estudos in vitro e in vivo. Os estudos in vitro confirmaram a especificidade do [18F] FHBG no monitoramento da expressão de HSV1-tk em linhagens celulares. No entanto, o [18F] FHBG não se acumulou nas lesões metastáticas in vivo e estudos posteriores serão necessários para uma melhor caracterização utilizando o [18F] FHBG. O resultado do tratamento combinado de p19Arf e IFNβ foi promissor para o tratamento de lesões metastáticas.

Palavras-Chave: neoplasms; melanomas; metastases; nuclear medicine; preventive medicine; immunotherapy; herpes simplex; nucleoproteins; interferon; targets; fluorine 18; gamma detection; positron computed tomography; emission computed tomography

FREIRE, MARIA R.V.B. Uso da tomografia por emissão de pósitrons (PET) para identificação precoce de metástases e investigação da eficácia terapêutica da combinação p19Arf e Interferon-Beta em melanoma murino. Orientador: Emerson Soares Bernardes. 2017. 139 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2018.tde-27072018-134611. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/29192. Acesso em: $DATA.

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