Abstract: O presente trabalho teve como objetivos realizar um levantamento para identificar a entomofauna associada a rações na cidade São Paulo/SP bem como avaliar o efeito da radiação gama em rações para alimentação de animais domésticos infestadas por pragas. Amostras de 20 lojas Pet Shop de diferentes regiões da cidade São Paulo/SP foram submetidas a triagens de 1 e 45 dias para coleta de insetos com auxilio de aspirador entomológico e peneiras de diferentes granulometrias. As espécies Sitophilus zeamais, Cryptolestes ferrugineus, Lasioderma serricorne e Oryzaephilus sp. apresentaram maior freqüência. Na avaliação dos efeitos da radiação gama utilizamos amostras de grãos de milho, sementes de girassol e mistura para roedores infestadas com insetos adultos das espécies Sitophilus zeamais, Lasioderma serricorne e Plodia interpunctella, após o periodo de 7 a 10 dias foram retirados os insetos e as amostras submetidas a doses crescentes de radiação gama. As espécies Sitophilus zeamais e Lasioderma serricorne foram submetidas as doses de 0,25 a 1,50kGy e a espécie Plodia interpuctella a doses de 0,10 a 2,0kGy. Decorridos 40 dias após irradiação avaliou-se o número de insetos emergidos. Os resultados dos bioensaios com Sitophilus zeamais como com Lasioderma serricorne demostraram que doses apartir de 0,5 kGy foram suficientes para causar letalidade dos ovos e larvas recém emergidas. Os resultados com a Plodia interpunctella a partir de 1,50 kGy, não emergiram insetos adultos, concluindo-se que essas doses foram suficientes para causar letalidade dos ovos e larvas.

Palavras-Chave: domestic animals; food; animal feeds; parasites; disinfestation; gamma radiation; bioassay

RAMOS, AMANDA C.O. Aplicacao da radiacao gama na desinfestacao de racoes a base de graos para alimentacao de animais domesticos. Orientador: Valter Arthur. 2009. 73 f. Dissertacao (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, Sao Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2009.tde-22092011-145055. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/9486. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Esta pesquisa propõe estudar as leishmanioses visceral (LV) e tegumentar (LT), em Ipatinga, município do leste mineiro, endêmico para a doença, analisando o perfil epidemiológico, distribuição temporal espacial e a interferência dos fatores climáticos da doença, no período de 2011 a 2017. O trabalho também visa correlacionar a evolução clínica e imunológica da leishmaniose humana visceral (LHV) entre os anos 2015 a 2017, por consulta a prontuários hospitalares e pela dosagem das citocinas: interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interferon gama (INF-ϒ) e fator de crescimento transformante beta (TGF-β). O trabalho mostrou que as leishmanioses visceral e tegumentar ocorreram em diferentes regiões geográficas, enquanto a menor intensidade de ventos e a baixa umidade foram relacionadas ao aumento de casos de LV no município. A presença de reservatórios infectados antecedendo a ocorrência de casos humanos foi demonstrada pela alta correlação entre a fração de cães infectados e os casos humanos no município. O comportamento clínico - imunológico da leishmaniose humana visceral evidenciou que crianças portadoras de LV de até 3 anos responderam imunologicamente à doença com maior produção de citocinas do que as demais idades de portadores da leishmaniose visceral, como mostraram os dados clínicos e laboratoriais.

Palavras-Chave: microorganisms; parasites; infectious diseases; animal tissues; skin; clinical trials; patients; dogs; testing; radioimmunology; beta particles; gamma radiation; epidemiology; climates; effective range theory; lymphokines; growth factors; spatial distribution; time dependence; brazil

GASPAR, LEA R. Avaliação dos perfis clínico, epidemiológico e imunológico da Leishmaniose Visceral em pacientes e cães sorotipos no município de Ipatinga - MG. Orientador: Olga Zazuco Higa. 2020. 131 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2020.tde-17092020-093904. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/31505. Acesso em: $DATA.

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Abstract: A terapia fotodinâmica (PDT) é uma modalidade terapêutica utilizada para causar morte celular baseada no uso de fármacos fotossensibilizadores e aplicação de luz com comprimento de onda adequado. No processo fotodinâmico, a molécula do fotossensibilizador (FS) é excitada para o seu estado singleto como resultado da absorção da luz gerando estresse oxidativo em diversas estruturas celulares, dentre elas a mitocôndria. A geração do estresse oxidativo pode induzir a resposta de morte por via apoptótica. Esse estudo tem como objetivo avaliar o tipo de resposta de morte celular em formas promastigotas metacíclicas de Leishmania (L.) amazonensis submetidas à PDT utilizando o azul de metileno como FS. Para isso algumas condições como captação do FS pela célula, potência de irradiação (100 mW/ 250m W), concentração do FS (50, 100, 250 e 500 μM) e tempo de irradiação (60 s /300 s) foram testadas para compreender a resposta do parasito a esse desafio leishmanicida. Após essas etapas foi investigada a viabilidade das promastigotas por meio da atividade mitocondrial utilizando o MTT ((brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium). Em seguida, a exposição de fosfatidilserina, a permeabilidade de membrana e a alteração de potencial de membrana da mitocôndria foram avaliados para analisar a via de resposta de morte celular provocada pela ação fotodinâmica e as possíveis mudanças morfológicas e ultraestruturais que esse parasito pudesse apresentar. Os resultados obtidos pelos testes \"in vitro\" de viabilidade celular (MTT) das promastigotas demostra que a terapia consegue diminuir a atividade metabólica em até 80%, na condição de 50 μM - 100 mW/300s. Foi possível concluir que promastigotas de L.(L.) amazonensis sofrem dano celular provocado pelo estresse oxidativo. A morte celular desse parasito é possivelmente por via apoptótica. A análise por microscopia eletrônica de transmissão indica danos celulares como encolhimento celular, arredondamento, vacuolização do meio intracelular, perda de integridade do flagelo e migração da cromatina nuclear para a periferia da membrana do núcleo do parasito.

Palavras-Chave: photoconductivity; nitrogen hydrides; ammonia; amines; methylene blue; in vitro; apoptosis; protozoa; parasites; skin diseases; antimicrobial agents; transmission electron microscopy; comparative evaluations

AURELIANO, DEBORA P. Efeito fotodinâmico mediado por azul de metileno na inativação de Leishmania (L.) amazonensis: estudo in vitro. Orientador: Martha Simões Ribeiro. Coorientador: José Angelo Lauletta Lindoso. 2015. 102 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2017.tde-13122017-103902. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/28419. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Toxoplasma gondii é um protozoário capaz de infectar uma ampla gama de seres vivos, dentre eles os felinos que são os hospedeiros definitivos da doença, toxoplasmose, e animais de pecuárias e aves. Em humanos o parasita também pode se apresenta de forma latente ou cística, a última podendo tornar-se crônica, fazendo com que o parasita possa se alojar no cérebro, retina ou músculos. A infecção ocorre pelo consumo de água ou alimentos contaminados com esporozoítos ou com cistos contendo bradizoítos encontrados em carne crua. Os taquizoitos da cepa RH possuem rápida replicação e relativa dificuldade de manutenção in vitro, frequentemente requerendo estágios de cultivo in vivo em animais experimentais. O uso da nanotecnologia pode contribuir para tipos de produção in vitro com potenciais ganhos de praticidade e rendimento, por meio do cultivo tridimensional de células de fibroblastos de camundongo e nanopartículas sintetizadas com radiação ionizante. O objetivo deste trabalho foi demonstrar a cultura tridimensional de fibroblastos agregados a nanopartículas para inoculação do T. gondii com a intenção de facilitar o manejo e a replicação in vitro do parasita. Nanopartículas de magnetita foram produzidas a partir da redução de sulfato ferro heptahidratado em pH altamente alcalino sob a ação das ionizações produzidas por feixe de elétrons entre 15 e 30kGy. As nanopartículas paramagnéticas foram adicionadas a cultura de células, que formaram uma interface ar-líquido através do campo magnético. Cada esferoide foi infectado por taquizoítos da cepa RH e mantidos em cultura para avaliação por microscopia eletrônica de transmissão e por microscopia de fluorescência com renderização em 3D. A presença do parasita foi confirmada por PCR e a quantidade de parasitas livres em cultura foi avaliada por citometria de fluxo. O modelo de cultivo tridimensional utilizado mostrou produção sustentável de taquizoítos em até 24 horas após ao inóculo, mostrando-se como um potencial substitutivo do uso de animais para manutenção do parasita.

Palavras-Chave: nanoparticles; three-dimensional calculations; cell cultures; in vitro; parasites; ionizing radiations

NASCIMENTO, ANA C.G. Estudo da eficiência da replicação in vitro do parasita intracelular Toxoplasma gondii em esferoides formados por nanopartículas paramagnéticas produzidas por radiação ionizante. Orientador: Daniel Perez Vieira. 2022. 74 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/D.85.2022.tde-03062022-121101. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/33129. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Cutaneous leishmaniasis (CL) is a zoonotic disease developed by protozoa parasites of genus Leishmania. It promotes destructive and ulcerated lesions with limited treatment options. There is an urgent need for the development of topical, cost-effective and efficacious treatments with minimized side effects to treat affected patients. The parasite-host interaction is of great importance since Leishmania parasites survive and replicate within host macrophages. As phagocytic cells, the activated macrophages produce reactive oxygen species (ROS) and nitric oxide (NO), which are toxic to pathogens, hence preventing parasites proliferation. However, Leishmania parasites can evade the host immune response and subvert antimicrobial macrophage defenses, thereby surviving within these cells even in harsh conditions. Indeed, the role played by ROS and NO in the control of CL has been under debate over the past years, emerging as potential alternatives to tackle this important neglected disease. In this regard, we aimed to evaluate the role of both NO and ROS towards antileishmanial activity using two different therapeutic strategies: (1) nitric oxide-releasing chitosan nanoparticles (NONPs) and (2) antimicrobial photodynamic therapy (PDT). For this, we focused on development and investigation of the potential of NONPs in vitro and in vivo against Leishmania amazonensis, one of the causative agents of CL. To assess the role of ROS, photodynamic therapy was investigated against different Leishmania species. Firstly, we evaluated the potential of organic light-emitting diodes (OLEDs) as a novel light source to inactivate in vitro promastigotes of L. major and L. amazonensis, using three phenothiazine dyes: Methylene blue, new methylene blue and 1,9-dimethyl methylene blue (DMMB). Then, we addressed the underlying mechanisms of DMMB-PDT upon promastigotes of L. amazonensis wild-type (WT) and miltefosineresistant (MFR) strains. DMMB-PDT effectiveness was also evaluated against intracellular amastigotes of WT and MFR together with cytotoxicity assay on mammalian cells. Our findings demonstrate that either NONPs or PDT are promising strategies to target CL and should be further explored for future preclinical and clinical trials.

Palavras-Chave: parasites; trypanosomes; skin diseases; chemical oxygen demand; nitric oxide; spectroscopy; light emitting diodes

CABRAL, FERNANDA V. Towards new therapeutic strategies for cutaneous leishmaniasis. Orientador: Martha Simões Ribeiro. 2021. 123 f. Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2021.tde-18112021-095721. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/32717. Acesso em: $DATA.

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Abstract: Toxoplasma gondii vs radiação ionizante: Imunidade humoral e celular em baço e intestino de camundongos isogênicos imunizados com taquizoítos irradiados por Cobalto 60 Andrés Jimenez Galisteo Jr. Estudamos o desenvolvimento de uma vacina para toxoplasmose utilizando a radiação ionizante como ferramenta. Aqui avaliamos o desenvolvimento da imunidade sistêmica e intestinal e a resistência à infecção, em diferentes camundongos imunizados, por via oral e parenteral, com taquizoítos irradiados a 255 Gy e desafiados com cistos da cepa ME49. Camundongos C57Bl/6j, BALB/c e C57Bl/6j IFN--/- foram imunizados com 107 taquizoitos de T. gondii irradiados a 255Gy por diferentes vias. As preparações de taquizoítos irradiados, por via oral e parenteral, induziram produção de imunoglobulinas IgG e IgA no soro de camundongos, sendo predominante a subclasse de IgG2b, determinadas por ELISA. A produção de IgM foi mínima. Os animais imunizados pela via parenteral, apresentaram uma maturação mais rápida da avidez de anticorpos IgG que os animais imunizados por via oral. Houve excreção de IgG, IgA e IgM nas fezes dos animais imunizados, mais intensa nos animais imunizados por via oral. No estudo da imunidade celular induzida por antígeno e detectada for real-time PCR, houve uma grande produção de IFN- por células esplênicas, menor por células das placas de Peyer intestinais, onde houve maior produção de IL-2. Houve proteção em todos os nossos esquemas avaliados, maior nos animais BALB/c. Os animais deficientes de IFN-, não foram afetados pelo processo de imunização e apresentaram produção de IgG e IgA sérico e excreção de S-IgA e S-IgM nas fezes, com menor numero de cistos cerebrais em animais imunizados por via parenteral. Todos nossos dados apontam para a possibilidade do desenvolvimento de uma vacina oral para toxoplasmose, utilizando taquizoítos irradiados, com aplicação prática na imunização de felinos domésticos e selvagens.

Palavras-Chave: parasitic diseases; ionizing radiations; mice; gamma radiation; cobalt 60; infectious diseases; parasites; immune serums; inoculation; immunity; mucous membranes; vaccines

GALISTEO JUNIOR, ANDRES J. Toxoplasma gondii vs radiacao ionizante: imunidade humoral e celular em baço e intestino de camundongos isogênicos imunizados com taquizoítos irradiados por cobalto 60. Orientador: Heitor Franco de Andrade Junior. 2008. 124 f. Tese (Doutoramento) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP, São Paulo. DOI: 10.11606/T.85.2008.tde-17082009-173434. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/11722. Acesso em: $DATA.

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